牛源多杀性巴氏杆菌与支原体双重PCR 检测方法的建立

为建立一种快速、准确、简便的多杀性巴氏杆菌与牛支原体双重PCR检测方法,参照GenBank中多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和牛支原体oppD/F基因序列设计2对引物,以2种病原的单重PCR的扩增体系和条件为基础,对双重PCR的退火温度、引物用量、模板用量进行优化,分析所建立的双重PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并将其应用于屠宰场273份疑似多杀性巴氏杆菌、牛支原体感染牛的肺脏组织样品验证。结果表明:所建立的双重PCR检测方法对多杀性巴氏杆菌和牛支原体具有特异性;双重PCR体系混合质粒的最低检测质量浓度为1.25×10-6 ng/μL,敏感性高;间隔2周的2次检测结果一致,重复性好;273份屠宰场样品的双重PCR检测结果与单重PCR检测结果符合率为100%。