龙胜凤鸡TBX5基因克隆、生物信息学分析及过表达载体构建

试验旨在探究TBX5(T-box Transcription Factor 5)基因在有、无毛脚鸡品种不同组织中的表达模式,并对其进行克隆、生物信息学分析及过表达载体构建。利用QRT-PCR检测TBX5基因在有、无毛脚鸡不同组织中的相对表达量;通过PCR扩增获得TBX5的CDS序列,并利用生物信息学软件对其序列及蛋白结构进行分析;通过双酶切构建TBX5过表达载体并利用QRT-PCR检测TBX5过表达效率。结果表明,相比广西麻鸡(鳞片脚),TBX5基因在龙胜凤鸡(毛脚)胫部特异性高表达;龙胜凤鸡TBX5基因CDS区全长1566bp,共编码521个氨基酸,与参考序列相比,存在3处同义突变及1处错义突变(c.296A>G引起蛋氨酸变为丙氨酸);同源性分析表明龙胜凤鸡TBX5基因与其他禽类的同源性均在92.8%以上;TBX5蛋白属于不稳定亲水性蛋白,不存在跨膜结构域和信号肽,蛋白二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链及无规则卷曲组成,三级结构主要由无规则卷曲及延伸链构成。本试验成功构建了pEGFP-TBX5过表达载体,QRT-PCR结果显示TBX5在过表达组极显著高于对照组。本研究结果为后续探究TBX5基因在鸡毛脚性状中的作用提供了理论基础。