摘要
目的探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的过程及结局的影响。方法从10只健康雌性无特定病原体级(SPF级)大鼠中提取肺成纤维细胞,用5 ng/mL TGF-β处理大鼠原代肺成纤维细胞的同时,给予不同浓度的hUC-MSCs对其共培养,其中A组(模型组,加入40μL TGF-β)、B组(5×10^(5)hUC-MSCs治疗组,加入40μL TGF-β和1 mL 5×10^(5)个hUC-MSCs)、C组(2×10^(6)hUC-MSCs治疗组,加入40μL TGF-β和1 mL 2×10^(6)个hUC-MSCs)、D组[正常组,加入磷酸盐缓冲液(PBS)40μL],采用蛋白免疫印迹法检测各组细胞内胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)蛋白表达量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞内结缔组织生长因子(CTGF),Smad2 mRNA的相对表达量。用5 ng/mL TGF-β处理大鼠原代肺成纤维细胞48 h后,将其诱导转化为肌成纤维细胞,再和不同浓度的hUC-MSCs共培养24 h,其中A组(模型组,加入40μL TGF-β)、B组(5×10^(5)hUC-MSCs治疗组,加入1 mL 5×10^(5)个hUC-MSCs)、C组(2×10^(6)hUC-MSCs治疗组,加入1 mL 2×10^(6)个hUC-MSCs)、D组(正常组,不用40μL TGF-β诱导,加入PBS 40μL),采用蛋白免疫印迹法检测各组肌成纤维细胞内CollagenⅠ、a-SMA蛋白表达量;采用RT-PCR检测各组肌成纤维细胞CTGF、Smad2 mRNA的相对表达量。结果在TGF-β诱导的大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中,A、B、C、D组大鼠CollagenⅠ和a-SMA的蛋白表达量均呈现降低趋势(均P<0.05);A、B、C、D组大鼠CTGF和Smad2 mRNA的相对表达量均呈现逐渐降低趋势(均P<0.05);大鼠原代肺成纤维细胞诱导转化为肌成纤维细胞后与不同浓度的hUC-MSCs共培养中,A、B、C、D组小鼠CollagenⅠ蛋白相对表达量和a-SMA蛋白相对表达量均呈现降低趋势(均P<0.05),但A组和B组小鼠CollagenⅠ蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C、D组大鼠CTGF和Smad2 mRNA的相对表达量均呈现逐渐降低趋势(均P<0.05),但B组和C组大鼠Smad2 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(均P<0.05)。结论hUC-MSCs可减少TGF-β诱导大鼠肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中表达Collagen、a-SMA蛋白及CTGF、Smad2 mRNA,降低肌成纤维细胞表达CollagenⅠ、a-SMA蛋白及CTGF、Smad2 mRNA,且高浓度的hUC-MSCs效果最显著。
