“秩边透水道”针法对卵巢低反应小鼠Notch1/Hes1/JAG1信号通路的影响

目的通过观察针刺对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠卵巢组织神经源性基因Notch同源蛋白1(notch receptor 1,Notch1)/Hes家族BHLH转录因子1(hes family bHLH transcription factor 1,Hes1)/锯齿状典型Notch配体1(Anti-JAG1antibody-CD339,JAG1)通路的影响,探讨“秩边透水道”针法治疗POR的可能机制。方法筛选动情周期正常的36只小鼠,按随机数字表分为空白组、模型组、针刺组;模型组和针刺组连续14天给予雷公藤混悬液灌胃以制备POR小鼠模型,空白组采用生理盐水等剂量灌胃,造模完成后针刺组取“秩边透水道”针刺治疗,每日1次,每次20 min,连续治疗14 d,随后三组同时促排,次日取材检测相应指标。阴道涂片法观测小鼠动情周期变化;比较各组小鼠卵巢指数;ELISA法检测小鼠血清中抗缪勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;HE染色法检测卵巢形态;TUNEL染色观察卵巢颗粒细胞凋亡情况;荧光定量PCR法和Western blot法测Notch1、Hes1、JAG1、BCL-2关联X的蛋白(Bcl-2 associated X,BAX)、B淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)mRNA和蛋白表达变化。结果与空白组相比,模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);卵巢组织形态变差,闭锁卵泡增多;获卵数、卵巢湿重和卵巢指数不同程度降低(P<0.01);血清中AMH、E2含量下降,FSH、LH含量升高(P<0.01);卵巢细胞凋亡面积增加(P<0.01),卵巢组织Bax mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01),Notch1、Hes1、JAG1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,针刺组小鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01),卵巢组织形态得到改善,闭锁卵泡减少,获卵数、卵巢湿重升高(P<0.01),卵巢指数升高(P<0.05);血清中AMH、E2含量提高,FSH、LH含量下降(P<0.01);卵巢细胞凋亡面积减少(P<0.01);卵巢组织Bax蛋白表达水平降低(P<0.01),Notch1、Hes1、JAG1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平提高(P<0.01,P<0.05)。结论“秩边透水道”针法可以改善POR小鼠卵巢反应低下,提高卵巢功能,其机制可能与调节Notch信号通路上的关键因子有关。