升阳祛湿方调控CCR3/Eotaxin/JAK2/STAT3抑制脾虚湿困型变应性鼻炎大鼠鼻黏膜嗜酸性粒细胞募集

目的基于C-C趋化因子受体3(CCR3)/嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)通路探讨升阳祛湿方(SQP)抑制脾虚湿困型变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)募集的作用机制。方法70只SD大鼠随机分为7组,包括空白对照组(CON组),变应性鼻炎组(AR组),脾虚湿困变应性鼻炎组(PAR组),阳性药-氯雷他定组(Y组),SQP高剂量组(H组),SQP中剂量组(M组),SQP低剂量组(L组)。CON组仅常规饲养,AR组通过“卵清白蛋白(OVA)腹腔注射+OVA生理盐水溶液滴鼻”法构建AR模型,PAR组、Y组及SQP各剂量组除与AR组同步构建AR模型外,另外采用“恒温恒湿箱饲养+隔日高脂饮食、力竭游泳+冷番泻叶水浸液灌胃”法建立脾虚湿困型AR病证复合模型。观察大鼠的一般情况和鼻部症状;计算腹围指数、脾指数;进行强迫游泳实验(FST)和旷场实验(OFT);全自动生化分析仪测定血脂指标;苏木素-伊红(HE)染色观察鼻黏膜组织病理学改变;迪夫快速染色(Diff-Quik Stain)观察鼻腔灌洗液炎性浸润情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测鼻黏膜组织CCR3、Eotaxin、JAK2、STAT3、p-STAT3的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测鼻黏膜组织CCR3、Eotaxin、主要碱性蛋白(MBP)、EOS阳离子蛋白(ECP)、EOS过氧化物酶(EPO)mRNA表达水平。结果AR组大鼠出现AR典型症状,PAR组除AR症状外,还伴有疲倦、便溏等脾虚湿困证典型表现,阳性药与SQP干预后AR及脾虚湿困证候学评分均明显降低(P<0.001);与PAR组比较,SQP各剂量组旷场运动总路程、中央格停留时间、直立次数均显著升高(P<0.01),表明脾虚明显缓解;HE和Diff-Quik染色显示鼻黏膜组织和鼻腔灌洗液的炎性浸润均有明显改善(P<0.001);SQP各剂量组鼻黏膜CCR3、Eotaxin、JAK2、p-STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),鼻黏膜CCR3、Eotaxin、MBP、ECP、EPO mRNA表达亦明显降低(P<0.05)。结论SQP可以通过CCR3/Eotaxin/JAK2/STAT3通路抑制EOS的活化趋化与脱颗粒作用,阻碍EOS向鼻黏膜定向募集,从而改善脾虚湿困型AR大鼠的症状。