番鸭细小病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析

为原核表达番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)VP3蛋白,评价MDPV VP3蛋白在番鸭中的抗原性。将MDPV VP3基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后,克隆至原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导表达和His镍柱纯化后,获得VP3纯化蛋白,并进行SDS-PAGE蛋白电泳和western blots鉴定。通过透射电镜观察MDPV VP3蛋白在大肠杆菌中形成病毒样颗粒的情况,以纯化后的VP3蛋白免疫种番鸭,评价MDPV VP3蛋白的抗原性。结果显示,MDPVVP3蛋白可在大肠杆菌BL21(DE3)中以沉淀包涵体的形式高效表达,SDS-PAGE和Western blots试验结果显示VP3目的条带大小为60kDa左右,与预期相符,纯化后VP3蛋白浓度为5.64mg/mL。通过透射电镜,可在VP3蛋白表达上清样品中观察到直径约为20nm的颗粒样物质,表明单独表达MDPV VP3蛋白可在大肠杆菌中自组装形成病毒样颗粒。将制备的VP3蛋白免疫种番鸭,利用间接ELISA试验检测番鸭血清中特异性抗体水平,免疫后14d,OD450值为0.75~0.90,表明制备的VP3蛋白抗原性良好。本试验在大肠杆菌中成功表达纯化MDPVVP3蛋白,具有良好的抗原性,具备研制MDPV亚单位疫苗的开发前景,本研究可为进一步评MDPVVP3蛋白的免疫保护效果提供前期基础。