基于ROS/Ras/MEK信号通路探讨四君子汤干预溃疡性结肠炎癌变的作用机制

目的探讨四君子汤通过ROS/Ras/MEK信号通路干预溃疡性结肠炎癌变(Ulcerative colitis Associated Carcinogenesis,UCAC)小鼠的作用机制。方法60只BALB/c小鼠适应性喂养一周,采用随机数字法分为正常组(10只)和造模组(50只)。造模组小鼠予以DMH溶液进行腹腔注射,自由饮用3%DSS溶液19周构建UCAC模型,经病理验证成功后,将造模组随机分为模型组(8只)、西药组及中药低、中、高剂量(每组10只)。中药低、中、高剂量组分别予以4.29 g/kg、8.58 g/kg、17.16 g/kg的四君子汤药液灌胃,西药组予以0.4 g/kg的柳氮磺吡啶肠溶片药液灌胃,正常组与模型组均给予等量生理盐水灌胃。造模期间,每日观察各组小鼠的一般状态。末次造模给药结束后,各组小鼠以1%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉,取小鼠病变结肠组织,HE染色观察结肠组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测Ras、MEK mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法(Western-blot,WB)检测Ras、MEK蛋白表达水平,免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)检测Ras、MEK2、MAP2K1蛋白表达水平。结果与正常组相比:模型组小鼠的一般状态相对较差,结肠组织存在着明显肠道黏膜组织损伤,ROS的含量明显上升(P<0.01),Ras、MEK mRNA转录水平提高(P<0.01),Ras、MEK、MEK2、MAP2K蛋白表达水平提高(P<0.01)。与模型组相比:西药组与中药各剂量组小鼠的一般状态较前明显改善,小鼠结肠组织黏膜结构有所修复;西药组ROS含量、Ras和MEK mRNA转录水平及Ras、MEK、MEK2、MAP2K1蛋白表达水平下降(P<0.01);中药中、高剂量组ROS含量均有所下降(P<0.05,P<0.01),中药各剂量组Ras和MEK的mRNA转录水平均下降(P<0.05,P<0.01),中药各剂量组Ras、MEK蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),中药低、高剂量组及中药中剂量组MEK2、MAP2K1蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论四君子汤能通过阻断ROS/Ras/MEK信号通路传导,修复UCAC小鼠结肠组织黏膜损伤,改善UCAC小鼠肠道炎症,从而达到干预UCAC进程的作用。柳氮磺吡啶肠溶片也可以通过阻断ROS/Ras/MEK信号通路传导,从而达到干预UCAC进程的作用。