烟草疫霉拮抗菌的分离鉴定及其生防和发酵特性

Isolation and identification of antagonistic bacteria Penicillium bilaiae against Phytophthora nicotianae and its biocontrol and fermentation characteristics

以湖南郴州广西中烟基地单元黑胫病发病区域采集的健康烟田土壤为样本,采用土壤原位平板培养法,从卵菌类群中的烟草疫霉生长的平板上筛选出1株对烟草疫霉有抑制作用的真菌LYQ01。经过18S-ITS序列扩增测序比对,发现该菌与拜赖青霉(Penicillium bilaiae)序列的匹配率为99.65%,因此初步鉴定为拜赖青霉。随后参照土壤磷循环有关的拜赖青霉菌株ATCC 20851的全基因组测序数据,设计4对引物,随机扩增得到次级代谢产物合成有关基因簇的4个片段,总长度约6 kb,测序后比对发现该菌的4个片段序列与拜赖青霉ATCC 20851的相似性达到了99.9%。利用该青霉菌进行烟草疫霉菌平板对峙试验,以及青霉菌发酵原液、提取液进行烟草疫霉和根结线虫的生防试验,论证其分泌的酶与代谢产物对植物根结线虫、烟草黑胫病菌具有抑杀作用。由于菌剂生产过程中调低pH值可以防止杂菌污染,因此确定青霉菌生长的酸性阈值为pH值2.5。利用几种单糖等有机碳源,初步分析该菌对碳源的利用情况,结果显示,木糖与燕麦片最适合作为青霉菌生长的碳源,其次是葡萄糖与果糖,最佳浓度为0.5 g/100 mL。为了后续对该菌株进行遗传操作,确定潮霉素B可以用于构建菌株遗传操作体系,其应用时的浓度范围为125~250μg/L。