糖肾宝干预巨噬细胞外泌体介导高糖培养的肾小球系膜细胞活化的研究

目的探讨糖肾宝复方干预的巨噬细胞外泌体对高糖环境下小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及Ets-1、IL-1β、IL-6表达的影响。方法小鼠灌胃给药,制备含药去外泌体血清与高糖环境下Raw264.7巨噬细胞共培养后,超速离心法获取外泌体,透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体标志蛋白,NTA法测定外泌体粒子直径和颗粒浓度。合成Ets-1-siRNA并转染小鼠MCs,MCs分为:正常组,高糖组,Ets-1-siRNA组,Control-siRNA组,TSB低剂量组,TSB高剂量组。RT-qPCR、Western Blot法检测各组细胞Ets-1、IL-1β、IL-6mRNA水平和蛋白表达,CCK-8法检测MCs增殖。结果小鼠血清及高糖环境下巨噬细胞速度生长,镜下观察到细胞内部出现类似于外泌体分泌气泡;外泌体形态为类球形,双包膜,“杯托”样囊状结构;粒径范围在150~165nm之间,浓度范围为(1.8E+11~6.6E+10)Particles·mL^(-1);外泌体阳性标志蛋白CD9、TSG101有所表达,阴性Calnexin无表达。与巨噬细胞外泌体共培养48h后,与正常组比较,高糖组及Control-siRNA组MCs Ets-1、IL-1β、IL-6 mRNA表达量和蛋白表达量均显著增加(P<0.01),Ets-1-siRNA组、TSB高剂量组和TSB低剂量组变化不明显(P>0.05);与高糖组比较,Ets-1-siRNA组、TSB高剂量组和TSB低剂量组Ets-1、IL-1β、IL-6mRNA表达量和蛋白表达量均显著下降(P<0.01)。与正常组比较,高糖干预各组MCs增殖均显著增加(P<0.01或P<0.05),与高糖组比较,Ets-1转染组、TSB高剂量组和TSB低剂量组MCs增殖均显著下降(P<0.01)。结论糖肾宝复方能抑制高糖环境下MCs细胞的增殖及活化,其机制可能与糖肾宝以巨噬细胞来源外泌体为载体或改善其外泌体功能,抑制MCs Ets-1的表达有关。