猪CFL2基因启动子的克隆及转录活性分析

Cofilins(CFL)包括CFL1和CFL2,是真核细胞中肌动蛋白结合蛋白家族的成员。哺乳动物CFL2基因主要在骨骼肌和心脏中表达,对肌纤维形成和肌肉再生具有重要作用。为了研究猪CFL2基因的转录,试验运用Genome walking对CFL2基因的主要转录起始位点上游2.5kb序列进行克隆;运用PCR扩增猪CFL2基因5′侧翼区的12个DNA片段,并插入荧光素酶报告载体pGL4.10构建重组载体;所有重组报告基因载体转染C2C12、NIH3T3或HeLa细胞,48h后分别测定其荧光素酶活性。生物信息学分析结果表明,该序列中存在2个TATA盒(-508和-453bp)、1个GC盒和1个CAAT盒;预测CFL2基因启动子区存在的转录因子结合位点有SP1、AP1、AP2和GATA-1。pGL4.10-1554(-1502^+51bp)的转录活性最高,启动子活性区域为-1502^-1317bp。本研究结果为进一步研究CFL2基因转录调控奠定基础。