鸽Ⅰ型副粘病毒F基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

将鸽Ⅰ型副粘病毒F基因亚克隆到p GEX-4T-1载体中,并用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌诱导表达。以纯化的F蛋白为诊断抗原,建立鸽Ⅰ型副粘病毒间接ELISA检测方法,用方阵法确定了间接ELISA检测的最佳条件:抗原1∶128稀释即抗原包被量为0.6μg/孔,血清1∶400稀释,与一抗的最佳作用时间为60 min,与酶标二抗的最佳作用时间为60 min,底物显色的最佳作用时间为15 min。用该方法对实验室保存的35份阳性血清和12份阴性血清进行检测,结果阳性符合率达到97%以上,阴性符号率达100%。