苯胺蓝比色法测定凝胶多糖含量的研究

利用苯胺蓝与凝胶多糖的β-1,3-D糖苷键特异性结合的原理,建立苯胺蓝比色法快速特异性测定凝胶多糖含量的方法。优化测定方法的样品制备、反应体系、温度和测定条件,比较分析各种多糖对测定结果的影响。将市售凝胶多糖标品溶液与苯胺蓝在碱性条件下35℃水浴30min,测定OD550值,得到R2=0.99788的标准曲线,检测浓度为0.05%-0.1%。从发酵液中提取凝胶多糖制作标准曲线,测定发酵液中凝胶多糖含量,与提取称重法比较其平均相对误差为4.98%。该方法克服目前常用的苯酚硫酸法、刚果红显色法测定凝胶多糖特异性差的缺点,又比提取称重法简单快速,对于跟踪发酵过程中凝胶多糖产量变化趋势进而更好地进行过程控制有很重要的意义。