信号肽突变促进透明质酸酶分泌的高通量筛选方法

为了增强透明质酸酶在微生物胞外的分泌表达,本文采用强组成型启动子P43,在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168基因组中整合表达水蛭来源的透明质酸酶,并利用RECODE突变技术构建信号肽突变库,通过高通量96微孔板初筛,将1000株突变株中胞外酶活提高50%以上的20株突变体进行摇瓶复筛,最终获得了三株胞外酶活显著提升的突变株B. subtilis MspLHyalA-C(比野生型LHyal酶活提高55.50%-66.85%),摇瓶中粗酶活最高达到6.04×104 U/mL,为透明质酸酶的定向进化提供了可行性方案。