恩施地区烟草病毒病的电镜诊断与RT-PCR鉴定

Electron Microscope Diagnosis and RT-PCR Identification of Tobacco Virus Diseases in Enshi Area

采集湖北省恩施地区疑似感染烟草病毒病的新鲜烟叶样品,提纯获取混合样品病毒粒子悬浮液,采用悬滴法进行负染,通过电镜观察对病原物进行初步鉴定。结果显示,病毒粒子悬浮液中存在大量线状、杆状与球状形态病毒粒子。进一步提取混合样品总RNA,使用马铃薯Y病毒属通用引物,TMV、CMV外壳蛋白序列特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物回收克隆用于测序,经BLAST程序与GenBank进行比对,感病样品中检出TMV、CMV、PVY,与电镜所观察到的病毒粒子形态结构一致。