端粒酶重现阻止人脐静脉内皮细胞老化

目的：外源性hTERT转染入原代培养人脐静脉内皮细胞，使粒酶活性重现，阻止人脐静脉内皮细胞老化，建立体外培养内皮细胞模型。方法：应用逆转录病毒转染法，将编码hTERT片段逆转当病毒载体与VSV－G共转染293－GP2细胞产生病毒上清，感染原代分离的人脐静脉内皮细胞，以嘌呤霉素筛选。观察细胞生长曲线，分析vWF等内皮细胞功能标志因子，鉴定hTERT转染入细胞基因组片段，细胞周期比较分析和β－半乳糖酶染色检测细胞衰老等。结果：生长曲线显示转染细胞生长速度基本与原代培养脐静脉内皮细胞一致但快于传至第16代后内皮细胞；RT－PCR及基因组DNA显示转染细胞有特异扩增；β－半乳糖苷酶染色法显示转染后细胞胞浆内着染阳性细胞数明显少于第16代内皮细胞。结论：外 源性hTERT转入原代培养人脐静脉内皮细胞，重现其端粒酶活性，从而阻止人脐静脉内皮细胞老化。