多重二次PCR在微量DNA标本检验中的应用

目的 :探讨用多重二次 PCR扩增极微量 DNA标本供后续 SSCP和 DNA测序分析。方法 :对照组取微量组织提取的DNA为模板 ,分别用不同的 4对引物各自行 PCR,同一 PCR反应体系里加入 4对引物扩增。然后将此扩增产物稀释 10 0 0倍为模板 ,再以相同引物进行第二次 PCR。实验组 :取微量组织提取的 DNA为模板 ,以与对照组相同的 4对引物各自进行 PCR。用琼脂糖凝胶电泳检测 PCR结果 ,用 DNA测序方法检测二次 PCR扩增产物的特异性。结果 :微量的 DNA标本可同时被多对引物二次扩增。实验组与对照组比较 ,各自引物扩增的 DNA片段在琼脂糖凝胶电泳显示区带速率相同 ,测序显示碱基序列相同。结论 :因极微量的 DNA模板不能满足多引物多次 PCR时 ,可用多重二次 PCR扩增 ,本方法在法医学。