长链非编码RNA ENSMUST00000127391重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建表达长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)ENSMUST00000127391(LINC127391)的重组慢病毒载体,并感染小鼠肾小球系膜细胞(mice mesangial cells,MMCs)使LINC127391在高糖的MMCs中表达。方法以MMCs的cDNA为模板利用PCR法扩增LINC127391全长,将其插入pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,构建重组慢病毒载体pCDH-LINC127391。将重组目的质粒pCDH-LINC127391与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染到293T细胞,收获表达LINC127391的重组慢病毒上清液,检测病毒滴度。病毒液感染MMCs,通过实时定量PCR法检测LINC127391的表达情况。结果质粒酶切以及测序鉴定结果证明重组质粒pCDH-LINC127391构建成功,并测得病毒液滴度约为2×10~7efu/mL。病毒液感染MMCs后实时定量PCR检测发现LINC127391表达明显增加。结论成功构建了重组质粒pCDH-LINC127391。