人vW因子A3区基因的克隆及其序列分析

目的 克隆人血管性血友病因子（von Willeberand Factor,vWF)A3区基因并进行序列分析。方法 应用Trizol一步法从原代培养的人脐静脉内皮细胞中抽提总RNA，应用RT-PCR扩增vWFA3区基因。并与pUCmT载体连接构建成重组克隆载体pUCmT-vWF-A3，全自动测序仪测量目的基因DNA序列。结果 RT-PCR从内皮细胞中扩增出约600bp的DNA片段，酶切鉴定插入目的基因片段的大小与理论计算一致。重组克隆载体pUCmT-vWF-A3经测序其结果完全正确。结论 本法可成功地克隆入vWFA3区基因片段，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。