丙型肝炎病毒核心区蛋白和细胞凋亡对HepG_2细胞周期的影响

目的:研究丙型肝炎病毒核心区(HCV-C)蛋白和细胞凋亡对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响.方法:首先运用基因重组技术构建包含HCV-C基因的真核表达质粒pcDNA3.1,然后利用脂质体介导将重组真核表达质粒转染肝癌细胞HepG2,经G418筛选获得稳定转染HepG2细胞(HCV-C转染HepG2细胞),经RT-PCR和间接免疫荧光法证实其中有HCV-C蛋白表达.然后进行如下实验:(1)MTT法检测HCV-C转染HepG2细胞、空白质粒转染HepG2细胞和未转染HepG2细胞生长增生率;(2)流式细胞术(FACS)检测三组细胞凋亡率和细胞周期,以及HCV-C转染HepG2细胞经Fas抗体诱导凋亡后的细胞周期变化.结果:(1)HCV-C转染HepG2细胞增生率显著高于空白质粒转染HepG2和未转染HepG2细胞增生率;(2)细胞未经Fas抗体诱导凋亡时,HCV-C转染HepG2细胞S期所占百分率高于未转染HepG2细胞S期所占百分率,HCV-C转染HepG2细胞凋亡率低于无HCV-C转染HepG2细胞凋亡率;HCV-C转染HepG2细胞经Fas抗体诱导凋亡时,细胞S期所占百分率低于未经诱导凋亡细胞S期所占百分率.结论:(1)HCV-C蛋白具有抑制HepG2细胞凋亡的作用;(2)HCV-C蛋白促进HepG2细胞从G0/1期进入S期,从而可能促进细胞生长增生,抑制细胞凋亡;Fas抗体诱导细胞凋亡时细胞被阻滞于G0/1期.