肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

Producing and activating of hepatocellular carcinoma cells lysate-pulsed dendrites cells vaccine in vitro

目的 :探讨制备肝癌树突状细胞 (DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法 :取健康人新鲜血 5 0mL ,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞 (PBMC) ,制备肝癌细胞冻融抗原 ,采用不同因子组合培养PBMC ,诱导和激活DCs,A组 :rhGM -CSF +IL - 4 ;B组 :rhGM -CSF +IL - 4 +冻融抗原负载 ;C组 :rhGM -CSF +IL - 4+TNF -α ;D组 :rhGM -CSF +IL - 4 +TNF -α +冻融抗原负载。结果 :各组均诱导出DCs ,并高表达CD11c和CD5 4 ,冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA -DR表达和IL - 12p4 0分泌 (P <0 .0 1) ,TNF -α促进CD86表达的作用更显著 ,但对IL - 12分泌无影响 ,依次用TNF -α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12p4 0分泌 (P <0 .0 5 )。CD5 4和HLA -DR双标记免疫细胞化学染色显示 ,各组DCs大多为CD5 4 +。表达HLA -DR的DCs均为CD5 4 +HLA -DR+,其中 ,A组CD5 4 +HLA -DR+细胞数量最少 ,D组最多 ,平均每个细胞HLA -DR的表达水平也与此对应。结论 :采用rhGM -CSF、IL - 4诱导的未成熟DCs,依次使用TNF