胰酶冷消化加刮刷法分离培养气管上皮细胞的实验研究

Study of enzyme digestion in low temperature with crushing for isolating and culturing tracheal epithelia cell

目的 :改进气管上皮细胞的培养技术。方法 :采用胰酶冷消化加刮刷法分离兔气管上皮细胞 ,测定分离细胞的数量、纯度及成活率 ,并与机械剥离加酶消化法、酶温消化加刮刷法进行比较。同时比较无血清与有血清培养方法对上皮细胞纯度、融合时间的影响。结果 :( 1)胰酶冷消化加刮刷法分离所得上皮细胞的数量 [( 8.2 17±0 .4 4 3)× 10 6cells/只 ]明显高于机械剥离加酶消化法 [( 2 198± 0 5 33)× 10 6cells/只 ],P <0 0 1;成活率 ( 91 730 %±1 5 32 % )明显高于机械剥离加酶消化法 ( 86 2 9%± 0 4 6 % )和胰酶温消化加刮刷法 ( 83 0 7%± 1 80 % ) ,均P <0 0 5 ;纯度 ( 94 0 8%± 2 70 % )接近机械剥离加酶消化法 ( 97 0 2 %± 0 5 1% ) ,P >0 0 5 ,但明显高于胰酶温消化加刮刷法( 88 90 0 %± 1 30 4 % ) ,P <0 0 5。 ( 2 )无血清组在培养第 3d( 95 0 %± 0 0 % )、第 5d( 95 3%± 0 3% )、第 7d( 95 3%±0 3% )气道上皮细胞纯度显著高于有血清组 ( 90 1%± 0 8% ,84 7%± 1 6 %和 83 0 %± 0 9% ) ,P <0 0 1;且细胞生长融合时间 ( 6 - 7d)明显早于有血清组 ( 12 - 14d)。结论 :胰酶冷消化加刮刷法是一种经济、简便、高效的兔气管上皮细胞体外分离培养方法 ,无血清培养可以提高?