曲古菌素A对血管平滑肌细胞p27kip1表达的调控机制研究

目的观察组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素A(Trichostatin A,TSA)对血管平滑肌细胞(VSMC) p27kip1基因表达的影响,并初步分析其调控的机制。方法采用RT-PCR法检测p27kip1 mRNA水平, Western blot法测定p27kip1和S-phase kinase-associated protein-2(skp2)蛋白表达,荧光分光光度法测定20S蛋白酶体活性。结果TSA对VSMC p27kip1 mRNA水平无影响,但其显著抑制血清诱导的p27kip1蛋白下调。加入20μg／ml亚胺环己酮(cycloheximide)阻断蛋白质的重新合成,TSA干预能显著延长p27kip1蛋白的半衰期。TSA对20S蛋白酶体活性无影响,提示TSA作用于泛素蛋白酶体系统的其他环节实现提高蛋白稳定性的作用。此外,TSA抑制血清诱导的skp2表达上调,且skp2表达与相应时点p27kip1蛋白呈负相关。结论TSA对VSMC p27kip1表达的调控不是在转录水平上实现的,而是通过翻译后机制抑制血清诱导VSMC p27kip1蛋白降解,其机制可能与TSA抑制泛素连接酶亚单位skp2表达有关。