实时荧光定量PCR检测c-erbB-2癌基因表达的应用研究

1 实时荧光定量PCR(real-time PCR)的工作原理和方法1.1 原理 1991年Holland首先提出了Taqman探针的原理,该法利用TaqDNA酶的5’→3’核酸外切酶活性水解结合在靶扩增子上的杂交探针。该探针的5’末端有一个报告基团为6-羧基荧光素(6-carboxy-fluoroscein,FAM),发射峰值在518nm;3’末端的猝灭基团为6-羧基四甲基若丹明(6-car-boxy-tetramethyl-rhodamine,TAMRA),发射峰值在582nm。3’末端被磷酸化,以防止探针在PCR过程中被延伸。