刺尾鱼毒素细胞毒性损伤特征与细胞信号传导

目的 本课题旨在观察刺尾鱼毒素 (MTX)的细胞毒性特征 ,研究胞内Ca2 +、AMP、蛋白激酶C(PKC)等信号物质对MTX细胞毒性的影响 ,并探讨其毒性作用机制。方法 选用神经胶质瘤细胞(NG10 8)为实验对象 ,应用MTT法观察细胞存活率 ,以结合蛋白竞争分析法测定细胞内cAMP含量 ,用Fura 2荧光标记法测定细胞内游离 [Ca2 +]浓度。结果 NG10 8细胞对MTX的作用较敏感 ,其细胞存活率下降呈量效 时效依赖性 ,MTX作用 1h的LD50 值为 0 .5 3μg·L- 1;光镜下可见细胞膜表面出泡、自培养板脱落、细胞膜裂解 ,细胞死亡。MTX的细胞毒性与胞外 [Ca2 +]变化密切相关 ,随着胞外 [Ca2 +]升高 ,MTX的毒性增大 ,胞外无Ca2 +时 ,观察不到MTX对NG10 8细胞的毒性作用 ;L 型Ca2 +通道阻滞剂硝苯地平可以明显抑制MTX的细胞毒性。MTX作用后细胞内游离 [Ca2 +]显著升高 ,MTX作用剂量越大 ,胞内游离 [Ca2 +]变化幅度越大 ,速度越快。MTX致胞内游离 [Ca2 +]升高与胞外 [Ca2 +]呈剂量依赖性 ,无胞外Ca2 +时 ,MTX作用后观察不到胞内游离[Ca2 +]变化 ,并且硝苯地平可明显抑制MTX作用后细胞内游离 [Ca2 +]的升高。低剂量MTX致NG10 8细胞胞内cAMP明显升高 ,尤其以 0 .5 μg·L- 1作用剂量为显著 ,并且这种效应呈Ca2 +依赖性。