乙酰胆碱酯酶的动态模式原子力显微成像观察

目的 用原子力显微技术 (AFM)动态模式对乙酰胆碱酯酶 (AChE)进行成像观察。方法 利用柱亲和层析法从电鳐电器官中提取纯化AChE。将纯化的AChE以 1∶10 ,1∶10 0 ,1∶5 0 0的比例稀释 ,分别取 5 μL滴于新鲜的云母表面 ,吹干 ,以双面胶固定于基底上 ,置于扫描器上进行成像。成像用岛津95 0 0J3SPM以动态模式在空气中进行。扫描器 :30μm× 30 μm。首先在大范围 ,size 2 0 μm ,z range 2 0 0nm以下 1Hz频率扫描 ,以便于发现AChE。继而缩小扫描范围 ,调节size ,z range和扫描频率 (0 .5Hz) ,调整成像条件以获得最佳成像为准 ,对AChE成像。结果 结果表明AFM可以获得AChE成像 ,图像除进行必要的平整处理及清除扫描线外不做任何处理。本实验观察到的AChE形态与文献中的描述相似 ,呈分散的椭圆形颗粒 ,短径 70～ 10 0nm ,长径 110～ 12 0nm ,高度为 0 .2 5～ 1.2 5nm ,与接触式扫描结果相比 ,蛋白颗粒边界较清晰。同时 ,由于动态式扫描对蛋白的纵向压力与横向摩擦力较小 ,因此成像具有更高的真实性和可信性。动态式扫描对AChE成像另一优于接触式扫描的特点是样品的制备比较简单。在接触式扫描中 ,为使AChE在AFM扫描成像过程中不易脱落 ,酶通过羧基化的MPA固定于镀有金膜的云母表面。