平滑肌细胞电位依赖性Ca通道的化学调节

最近,细胞电位依赖性离子通道及其相关蛋白的磷酸化和脱磷酸化,作为内因性调节离子通道的开放和关闭的机制之一,已受到人们的关注。例如,在肌细胞中,骨骼肌 T 管膜和心肌上的 L—型 Ca 通道由 A 激酶调节,而平滑肌细胞(如:青蛙胃平滑肌以及大鼠主动脉平滑肌培养细胞)的 Ca 通道则由 C 激酶调节。在本研究中,作者利用豚鼠结肠带平滑肌,研究了通道蛋白的磷酸化参与电位依赖性 Ca 通道调节的可能性。实验方法1.细胞分离:用 Obara-Yabu 法和 Obara法,将豚鼠结肠带平滑肌进行细胞分离,放入 KB 修正液中,4℃保存2小时,供实验用。2.膜片钳制法:在 Hamil 等人的方法基础上,用全细胞方式记录电流。3.试剂:用胶原酶(type-1,sigma)、胰蛋白酶抑制剂(type-1s)、白蛋白(组分 V)分离细胞。