摘要
目的 为了探讨HA是否参与ZP诱发的AR，它的激活是否依赖于Ca^2+的存在以及HA在豚鼠精子AR过程中的信号转导通路。方法 将豚鼠精子悬浮在最小获能培养基(MCM-LCa^2+，23μM／LCa^2+)中预培养1h后，用[^11C]氯化胆碱或[^11C]花生四烯酸(AA)标记精子，并持续获能培养5h。经间断percoll密度梯度(30％～55％～85％)离心、洗涤。并将精子重新悬浮于MCM—LCa^2+培养其中。然后暴露于1mM/LCa^2+和／或ZP、百日咳毒素(PIX)、PLA2抑制剂、EGTA和甘油二脂激酶抑制剂(DAGKI),15分钟。精子膜脂类的提取、分离和鉴定采用Roldan和Varquer（1996)所报道方法。同时部分精子用相差显微镜检测AR百分率。结果获能精子Ca^2+／ZP合并应用后，可进一步加速AA释放和溶血磷脂酰胆碱(LysoPC)产生。同时伴有磷脂酰胆碱减少(这些变化是PLA2活性的指征)。Ca^2+／ZP的刺激亦导致精子AR率的增高；上述效应可被PLA2抑制剂马兜铃酸所阻断；采用PIX(G蛋白抑制剂)作用于已获能精子。结果发现由ZP引起AA和LysoPC含量升高以及AR率增加的效应均可被PIX抑制；23μMCa^2+存在下。精子虽不发生AR，但AA释放和LySoPC生成仍维持于较低的水平，而加入2mMEGTA(Ca^2+螫合剂)或250μMCa^2+(Ca^2+通道阻滞剂)可抑制HA的激活，导致AA和LySoPC的生成降低。DAG激酶抑制剂及K59022可加速AA及LySoPC产生,并促进口激发的AR。结论 上述结果表明，PLA2在四诱发豚鼠精子AR过程中起着关键作用,其激活仅需要低钙参与,同时PLA2活性受DAG和G蛋白介导信号转导通路的调控。
