人内抑素在大肠杆菌中表达纯化及其抗肿瘤效应

血管内皮细胞抑制素(简称内抑素,Endostatin)是XⅧ见胶元C端片段蛋白,分子量为20Kd,主要是通过抑制血管内皮细胞的生长和肿瘤血管的形成来达到抑制肿瘤的作用.内抑素对各种肿瘤模型均具有极强的抑制效果,且无耐药性和毒副作用,因此该药已成为肿瘤治疗的一个崭新的治疗途径和新药开发热点.我们通过PCR的方法先从人胚肝cDNA库中扩增得到0.54Kb的内抑素基因片段,将其克隆入pETz原核表达载体中,得到pET/ENDO重组表达质粒,将该质粒导入BL21宿主菌后进行诱导表达,结果表明:经IPTG诱导后,细菌表达的重组内抑素蛋白量占菌体蛋白的50%以上.将工程菌进行扩大培养和诱导,按常规提取包含体的方法制备包含体蛋白,所得蛋白的纯度即可达90%以上.将粗蛋白固定在肝素-Scpharosc 6B柱上脱脲,氧化复性,然后用NaCI洗脱即得到重组内抑素纯品,纯度大于95%.以ECV304人胚胎血管内皮细胞为靶细胞,用MTT微量法测定重组内抑素的生物学活性。