伊氏锥虫对安锥赛抗药性机制中的TbTA1基因

为探讨伊氏锥虫对安锥赛抗药性的分子机理,以已报导的布氏锥虫对砷剂药物抗药性相关的TbTA1基因设计引物,以不同退火温度(55℃、57℃、60℃、63℃和65℃)和不同DNA聚合酶(Clontech的50×AdvantagePoly-meraseMix和上海生物工程公司的Taq聚合酶),分别从伊氏锥虫敏感株(C03)的cDNA和基因组DNA中分离出TbTA1基因的全长序列,而从抗药株(C7)的cDNA和基因组DNA中都没分离出TbTA1基因,这表明抗药株的Tb-TA1已发生改变;根据TbTA1的5'端和1041端设计引物,从敏感株和抗药株都分离到约1000bp的片段,这表明因安锥赛抗药性的产生而TbTA1的改变主要发生在TbTA1的1042-1415部分。由此确定TbTA1与伊氏锥虫的安锥赛抗药性有关。将伊氏锥虫敏感株的TbTA1克隆、测序,其序列与布氏锥虫TbTA1序列比较,它们有10个碱基不同,即第88位的GT.e-AT.b、第144位的TT.e-CT.b、第224位的CT.e-TT.b、第471位的CT.e-TT.b、第472位的AT.e-GT.b、第549位的GT.e-TT.b、第1008位的CT.e-TT.b、第1033位的AT.e-GT.b、第1293位的AT.e-GT.b和第1384位的TT.e-CT.b,其中有5个碱基所编码的氨基酸不同,即Val30T.e-IleT.b、Ala75T.e-ValT.b、Ile158T.e-ValT.b、Thr345T.e-AlaT.b和Ser462T.e-ProT.b。