优化PCR条件扩增人IL-10 cDNA及其原核表达载体构建

目的 :探讨PCR扩增人IL 10基因片段的最佳反应条件并构建人IL 10原核表达载体。方法 :运用降落PCR扩增 5 ’端GC含量高的人IL 10基因片段 ,主要对退火温度和热启动等因素进行优化选择 ;载体和PCR产物经拓扑TA克隆技术连接 ,常规方法转化、筛选阳性重组质粒。结果 :PCR反应的最佳退火温度为 68 5℃ ,此时扩增出的DNA片段大小符合预期设想 ,并通过菌落PCR和DNA测序得到证实。结论 :在上述条件下获得的PCR产物纯度高、非特异性产物少 ,成功地构建了人IL 10原核表达载体。并提示降落PCR是一种潜在的一步找到最佳扩增条件的方法。