摘要
目的克隆并分析抗原单克隆抗体H链和L链的可变区基因。方法提总RNA,由生物公司提供的单克隆抗体的杂交瘤细胞系中提取并进行反转录。根据小鼠可变区的不同序列而设计特异性引物,这一组引物被用来对单克隆抗体c DNA的可变区通过PCR扩增。轻链的创串区和重链,通过5’RACE法扩增克隆转入到p MD18-T载体中,进一步进行蓝白斑筛选,选取阳性克隆子对其可变区基因进行测序分析。结果单克隆抗体的重链可变区基因序列的全长为426 bp,编码142个氨基酸残基。轻链的可变区的长度为396个碱基,编码132个氨基酸残基。在IMGT、NCBI中对氨基酸序列进行了分析比对,发现与小鼠Ig G可变区同源性高达99%。并且对所述重链根据Kabat方法进行了分析,确定了三个抗原互补决定区四个框架区和前导肽。结论测序单克隆抗体的服务包括mRNA的分离,PCR扩增,所述重链和轻链,转化成标准的矢量测序,阳性克隆菌落选择,分析五个独立的数据测序克隆。
