硫化烟酸对血管内皮细胞损伤模型的保护作用

目的合成硫化烟酸,建立动脉粥样硬化(AS)细胞模型,探讨该缩合物是否对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮损伤具有保护作用。方法 (1)采用酯缩合等化学合成方法,将原料药烟酸与茴三硫缩合,应用MS、NMR对化合物的结构进行鉴别;(2)利用微孔滤膜吸附法对新合成的化合物进行H2S释放检测;(3)用浓度为80μg·m L-1oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立AS细胞模型,通过油红O染色观察不同阶段细胞内脂质的活性变化规律对其生物特性进行鉴别,并采用总胆固醇、游离胆固醇试剂盒检测不同阶段细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(Fch)含量,Fch占TC含量的50%,则表明造模成功;(4)采用浓度为500μmol·L-1的硫化烟酸作用此细胞模型,设置对照组(Na SH、茴三硫、烟酸)和空白组,通过CCK8法检测细胞增殖活力。结果 (1)通过MS和NMR的检测,表明所得产物合成成功。(2)微孔滤膜法H2S释放检测:空白组的释放量为(18.11±1.69)nmol(/min×106cell);对照组分别在50,100,200,500,1000μmol·L-1时释放量为:(1)Na SH(20.98±4.21,21.46±2.72,23.32±3.54,26.15±1.99,25.89±5.13)nmol(/min×106cell),(2)茴三硫(20.42±1.98,21.67±2.83,24.02±3.52,28.25±2.09,25.49±1.87)nmol(/min×106cell),(3)烟酸(18.12±1.38,17.20±3.63,18.02±4.12,18.99±3.21,19.49±2.34)nmol(/min×106cell);(4)实验组分别在50,100,200,500,1000μmol·L-1时释放量为:(21.31±3.01,23.22±3.91,28.86±3.78,32.51±3.12,25.27±4.04)nmol(/min×106cell)。结果表明新合成化合物在500μmol·L-1时,H2S释放量最大。(3)oxLDL诱导12 h开始,HUVEC细胞内出现大量红染颗粒,游离胆固醇和总胆固醇均比对照组增加,细胞游离胆固醇含量大于总胆固醇的50%,表明AS细胞模型建立成功。(4)硫化烟酸作用于AS细胞模型12 h后,通过CCK8法检测细胞增殖活力,其中实验组与对照组相比有明显增加(P<0.05)。结论利用ox-LDL诱导HUVEC细胞12 h-72 h后,细胞形态以及Fch/TC的比值符合AS细胞模型的生物学特征,表明成功的建立了AS细胞模型。CCK8法细胞增殖活力的检测证明了硫化烟酸对ox-LDL诱导的血管内皮损伤具有一定的保护作用,为H2S供体型药物的研发与临床治疗提供有价值的参考。