应用SILAC方法发掘2个萜类物质诱导A549细胞凋亡的新机制

目的探讨蓝萼甲素、冬凌草甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的新机制。方法蓝萼甲素、冬凌草处理A549细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并采用蛋白免疫印迹法检测cleaved PARP表达;应用稳定同位素标记氨基酸细胞培养(SILAC)定量蛋白质组学方法分析蓝萼甲素、冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡后蛋白质差异表达谱,并验证差异蛋白表达情况;蓝萼甲素联合应用自噬抑制剂、冬凌草甲素结合ADRM1过表达作用于A549细胞后细胞凋亡情况。结果蓝萼甲素、冬凌草甲素作用于A549细胞后,结果显示给药组细胞凋亡率、cleaved PARP蛋白表达明显上升;蓝萼甲素、冬凌草甲素诱导A549细胞凋亡后均约有150个蛋白表达发生显著变化,所选择验证的m TOR与ADRM1的蛋白免疫印迹结果与组学分析结果是一致的;联合应用蓝萼甲素和自噬抑制剂、冬凌草甲素结合ADRM1过表达作用A549细胞后,细胞存活率进一步下降,cleaved PARP表达水平进一步增加。结论基于组学分析手段可深入发掘2个萜类物质诱导A549细胞凋亡的机制,为肺腺癌化疗提供潜在靶标。