载脂蛋白E4通过脑内CD1-NKT促进单纯疱疹病毒Ⅰ型感染诱导的Aβ沉积和炎症反应

目的阿尔茨海默病(AD)是一种老年人常见的神经退行性疾病,其发病机制尚不清楚。载脂蛋白Eε4(APOE4)等位基因是目前唯一公认的散发性AD的高风险遗传因素。流行病学和临床研究提示,单纯疱疹病毒I型(HSV-1)感染与AD发病有关,并且HSV-1感染在APOE4基因携带者AD患病风险最高,提示APOE4基因型影响HSV-1感染诱发AD发病。本课题旨在研究APOE4对HSV-1经鼻感染诱发的脑内HSV-1病毒载量、Aβ沉积及神经免疫的影响。方法 HSV-1分别经鼻感染9月龄雌性APOE4-和APOE3-TR小鼠,分别应用PCR技术和Western蛋白印迹法检测并比较小鼠脑内HSV-1DNA,HSV 1病毒g C包膜糖蛋白水平;应用Western蛋白印迹法和ELISA检测并比较脑内淀粉样前体蛋白(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)及TNF-α,IL-6等炎症因子的表达;应用DAB免疫组化和免疫荧光染色检测小胶质细胞,免疫荧光染色检测脑内NKT细胞,Western蛋白印迹法和流式细胞技术分别检测小鼠脑内CD1d蛋白和CD1阳性细胞。结果小鼠HSV-1经鼻感染7 d后,在嗅球、皮质、海马等脑组织均能检测到病毒DNA和g C蛋白,并且APOE4-TR小鼠脑内HSV-1病毒载量明显多于APOE3-TR小鼠;APOE4-TR小鼠脑内APP的表达和Aβ蛋白水平也明显高于APOE4-TR小鼠。免疫组化及ELISA检测显示,HSV-1感染后小鼠脑内小胶质细胞激活,TNF-α和IL-6炎症因子水平明显增加,并且APOE4-TR小鼠脑内炎症因子水平增加更为明显;而HSV-1感染后APOE3-TR小鼠脑内CD1水平的增加比APOE4-TR更为明显,APOE3-TR小鼠脑内也更易在检测到NK T细胞存在。结论 APOE4促进脑组织内HSV-1病毒载量、Aβ沉积及小胶质细胞分泌炎症因子,却减弱脑内CD1和NK T细胞参与的免疫应答反应。提示APOE4促进HSV-1感染诱发AD可能与CD1和NK T细胞参与的免疫应答异常有关。