动物乳腺组织高效表达通用型YAC载体的构建

以含有人α-乳白蛋白基因功能域的YAC(yeast artificial chromosome)为起始材料，构建了可以在动物乳腺高效表达外源基因的载体系统。根据已发表的人α-乳白蛋白基因序列，通过PCR的方法，扩增出了其5’端的837bp及3’端的1007bp片段，构建了整合型载体pRLA22。利用pRLA22在大肠杆菌中进行基因操作，可以将外源基因准确地置于乳白蛋白基因启动子控制之下。把重组的pRLA22导入含YAC的酵母菌后，高频率同源重组事件将会把外源基因插入YAC。本实验通过上述程序，将鸡的γ-干扰素基因cDNA序列导入了YAC。经过PCR检测，证明鸡的γ-干扰素cDNA序列已被重组到YAC的预定位置。因此，大肠杆菌载体pRLA22和含人的α-乳白蛋白基因的YAC，将构成能在动物乳腺高表达外源基因的有效载体系统。