SBP2基因哺乳动物表达载体的构建及其初步表达分析

目的克隆硒半胱氨酸插入序列(SECIS)结合蛋白(SBP)2基因,并构建其哺乳动物表达载体,导入293T细胞进行初步表达,分析其对硒蛋白P基因转录水平的影响。方法应用酶切的方法从保存的质粒p CMV-XL4-SBP2中将目的基因切割下来,并利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pc DNA3.1(+)。采用脂质体转染法转染293T细胞后应用RT-PCR法检测SBP2基因的表达以及其超表达对硒蛋白P基因转录水平的影响。同时在转染细胞中添加无机硒后研究其对SBP2和硒蛋白P基因转录水平的调控。结果成功构建了SBP2表达质粒pc DNA3.1-SBP2,转染293T细胞后实现基因的超表达,同时添加硒对SBP2基因的表达有明显影响。SBP2基因的超表达显著提高硒蛋白P的转录水平,添加硒进一步增加了硒蛋白P的转录。结论 SBP2哺乳动物表达载体的成功构建以及SBP2超表达后的作用分析为下一步深入研究硒蛋白的生物合成机制奠定了基础。