摘要
目的研究不同温度对人类肽基脯氨酰顺反异构酶(hPPI)体外交联反应的影响。方法以人总RNA为模板设计正反引物进行h PPI基因克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法将hPPI基因中两个半胱氨酸(Cys)突变为丝氨酸(Ser),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达正常型和突变型蛋白,在不同温度条件下进行蛋白交联反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定交联现象。结论与溶菌酶表现相似,正常型hPPI蛋白交联反应随温度升高而逐渐加快,在达到蛋白变性温度时交联反应最明显,出现大量二聚体和多聚体条带;将突变型hPPI蛋白置于与正常型hPPI蛋白完全相同的反应条件下,观察不到任何交联条带。结论热变性可显著改变蛋白高级结构,蛋白对热变性无明显特异性,在变性温度临界条件下表现出相同的聚合作用;二硫键可导致蛋白结构改变,从而影响交联结果。
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第16期4460-4463,4463,共4页
Chinese Journal of Gerontology
基金
山东省高等学校科技计划项目资助(No.J13LK18)