细胞周期蛋白D1 RT-PCR ELISA的建立及其初步应用

目的:建立一种灵敏、特异和简便实用的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平的检测手段.方法:生物素标记Cyclin D15’端引物,PCR DIG La-belingMix取代dNTP,RT-PCR终产物置于链霉亲和素包被的ELISA板中孵育,洗涤、显色后,自动酶联检测仪测A450nm值.常规RT-PCR方法作对照.检测对象包括CyclinD1表达细胞系SGC7901,转染反义Cyclin D1基因的SGC7901D1AS细胞及转染空载体的SGC7901neo细胞,原发性胃癌组织30例、胃癌旁和正常胃黏膜组织20例,胃良性病变组织22例.结果:RT-PCRELISA与RT-PCR琼脂糖电泳检测结果吻合,所测得的A450nm值与CyclinD1特异性基因片段的丰度和检测细胞数量有—很好的对应关系.SGC7901胃癌细胞转染CyclinD1反义基因后,Cyclin DlmRNA表达显著降低(P<0.05).Cyclin D1mRNA在胃良性疾病起即开始明显升高(P<0.05).在胃癌各组中,进展期胃癌伴转移组的Cyclin D1mRNA表达水平显著高于其他两组(P<0.05).结论:本文建立的Cyclin D1 RT-PCR ELISA可作为一种侯选的、较为简便和半定量的cyclin D1mRNA检测方法.