用积分法测定血清芳香酯酶活性

Assay of serum arylesterase activity by the integrated method

目的 以血清芳香酯酶 (ArE)为模型 ,用模拟和实验考察积分法测定酶活性的可靠性。方法 用酚乙酸酯测定ArE反应曲线。按ArE的积分速度方程In(S0 /Si) +(S0 -Si) /Km=(Vm/Km)×ti 计算无误差反应曲线 ,叠加随机误差得模拟曲线。以底物浓度 (S0 )为参数用Equ① 非线性拟合测定Vm/Km,换算得Vm。结果 模拟表明积分法测定酶活性与S0 无关 ,升高S0 可提高测定上限。实验表明S0 低于Km 的 2 0 %时Vm/Km 无变化 ;重复性 5 8%(ν =6) ;本底和反应起点延迟无干扰 ;升高S0 可提高上限。此积分法用 2 0 %Km 的S0 测定 86份血清 ,ArE活性Vm 呈正态分布 ,与据初速度按米氏方程计算的Vm 无差异。结论 此积分法能可靠测定酶活性Vm/Km 或Vm。