多重PCR检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究

建立快速检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的多重PCR(MPCR)方法。针对古典型霍乱弧菌 (CVC)和埃尔托型霍乱弧菌 (EVC)的共有序列霍乱肠毒素基因 (ctxB)、CVC的毒力协调A亚单位基因 (C -tcpA)、EVC的毒力协调A亚单位基因 (E -tcpA)、副溶血性弧菌的热稳定性直接溶血素基因 (tdh)为靶序列设计引物 ,建立多重PCR检测方法 ,相应扩增片段依次为 5 6 4bp、6 17bp、4 71bp和 2 0 2bp。用该方法检测EVC、CVC、副溶血性弧菌、非O1群霍乱弧菌、沙门氏菌等 35株菌株表现出极好的特异性 ,对人工污染的罗非鱼、小虾、牡蛎、鱼鳃和鱼肠混合物的检出限EVC为 2 .2cfu/mL、CVC为 2 .8cfu/mL、副溶血性弧菌为 6 .5cfu/mL ,扩增片段表现出极好的特异性 ,整个实验过程 8～ 10h完成。实验结果表明该方法是特异性强、省时、省力的检测方法。