^（１３１）Ｉ标记抗人肺癌单克隆抗体＿３Ｄ＿３对裸鼠载人肺癌的放射免疫显像研究

用氯胺T法标记抗人肺癌单克隆抗体(McAb3D3),对载人肺腺癌L342裸鼠进行体内生物学分布和肿瘤的放射免疫显像研究。i.P.131I一McAb3D3后24一120h,肿瘤部位的放射性显示出选择性浓聚,以72一120h的影像最为清晰;而注射131ImIG则呈全身性均匀分布,无肿瘤部位选择性浓聚影像。在72h,13种器官的TANT比值均大于3,肿瘤LI为26.47。本文结果表明McAb3D3在肺癌的诊断和导向治疗方面可能有良好的应用前景。

(131)I标记抗人肺癌单克隆抗体_3D_3对裸鼠载人肺癌的放射免疫显像研究##2@颜江华,杨善民,郑耘,陈福,苏金华,俞浩,盛荣宗$厦门大学抗癌研究中心, 厦门市第一医院同位素室##3用氯胺T法标记抗人肺癌单克隆抗体(McAb3D3),对载人肺腺癌L342裸鼠进行体内生物学分布和肿瘤的放射免疫显像研究。i.P.131I一McAb3D3后24一120h,肿瘤部位的放射性显示出选择性浓聚,以72一120h的影像最为清晰;而注射131ImIG则呈全身性均匀分布,无肿瘤部位选择性浓聚影像。在72h,13种器官的TANT比值均大于3,肿瘤LI为26.47。本文结果表明McAb3D3在肺癌的诊断和导向治疗方面可能有良好的应用前景。##4肺腺癌,单克隆抗体,裸鼠,放射免疫显像##5￣(131)I标记抗人肺癌单克隆抗体_3D_3对裸鼠载人肺癌的放射免疫显像研究颜江华,杨善民,郑耘,陈福,苏金华,俞浩,盛荣宗厦门大学抗癌研究中心[摘要]用氯胺T法标记抗人肺癌单克隆抗体(McAb3D3),对载人肺腺癌L342裸鼠进行体内生物学分布和肿瘤的放射免疫显像研究。i.P.131I一McAb3D3后24一120h,肿瘤部位的放射性显示出选择性浓聚,以72一120h的影像最为清晰;而注射131ImIG则呈全身性均匀分布,无肿瘤部位选择性浓聚影像。在72h,13种器官的TANT比值均大于3,肿瘤LI为26.47。本文结果表明McAb3D3在肺癌的诊断和导向治疗方面可能有良好的应用前景。关键词肺腺癌,单克隆抗体,裸鼠,放射免疫显像McAb3D3是本室建立的一株抗人肺癌单克隆抗体,其初步生物学特性已经报道[1]。为进一步观察其在活体内与肺癌组织的反应性及亲和力,本文应用氯胺T碘标技术观察131I-McAb3D3,在载瘤裸鼠体内的分布特点和肿瘤组织显像的情况,结果报道如下。材料和方法一、McAb3D3的腹水生产和纯化McAb3D3本室制备,为IgG1其杂交瘤注射于BALB/c小鼠腹腔,产生腹水,McAb3D3腹水用正辛酸一硫酸铵沉淀法[2]纯化后,PAGE鉴定纯度,Du一65型uv分光光度仪测抗体浓度,计算公式:C(mg/ml蛋白)=OD28Onm×1.45一OD260nm×0.74。二、载瘤裸鼠模型的建立选择在体外对McAb3D3有较强反应性的肺腺癌细胞株L342接种于BALB/c裸小鼠背部皮下(本中心裸鼠室提供,SPF级),细胞用量5X106/点,实验取用载瘤1一2cm3的小鼠。三、McAb3D3的131I标记采用氯胺T碘标法[3],取抗体蛋白100μl(约800μg)与100μl(136MBg)131I混匀后,立即喷注0.4%氯胺T100μl、于4℃反应3min,加1.O%偏重亚硫酸钠100μl终止反应。用SephadexG一25(1X20cm)柱分离游离的131I,收集第一峰,无菌过滤后备用。以同法制备标记的小鼠IgG(mIgG,本室制备)作为非特异性对照抗体。四、碘标记McAb体外免疫活性鉴定间接免疫荧光法(IFA)靶细胞为L342,接种于玻片上,甲醇固定后备用。以未标记的3D3细胞培养上清做为阳性对照,进行滴度测定。RIA法按参考文献[4]进行,靶细胞L342A10/1.0ml/管,以含5%NCS及1%牛血清白蛋白的PBS封闭30min,加131I一McAb3D3或131I-mIG10μl(约含105cpm),于37℃孵育lh,以0.0l-molPBS(pH7.2)洗涤3次,弃上清分别γ计数。以B/T%表示免疫活性(T表示加入的131I-McAb3D3或131I-mIgG的总放射量)。五、碘化抗体的体内分布和显像载肺癌L342裸小鼠10只,实验组和对照组各5只,注射131I-McAb前3天起给饮0.1%KI水以封闭甲状腺。腹腔注射131I一McAb-3D3100μci/只,注射后每隔24h用GZ-B型γ照相机(中国航天航空二部产品)进行全身扫描和显像共5天,并在各时间点上活杀一鼠,取肿瘤、全血及各重要脏器,称重后进行γ计数。计算各样品的放射性比度(CPm/g)、T/NT值(瘤与非瘤组织的放射性比值和定位指数(实验组的组织与血CPm/g比除以对照组的组织与血CPm/g之比)。地址:厦门市思明区大学路182号.邮编361005厦门市第一医院同位素室结果一、McAb3D3及131I-McAb3D3的鉴定正辛酸一硫酸铵沉淀法纯化的McAb3D3经PAGE电泳显示为单一条带。氯胺T碘标法标记率为50%。IFA显示131I-NcAb3D3收集液在1:105仍有明显的阳性反应;RIA结果为131I-McAb3D3的B/T%为48.2%,而131I-mIgG仅为4.1%。二、131I一McAb3D3在载瘤裸鼠体内的生物学分布1.T/NT的变化在注射标记物24h,实验组和对照组除脑(14.27和9.22)外,其它组织的均值分别为3.08(1.59一8.24)和0.49(0.25一1.44);而72h,则分别为16.72(3.2一57.54)和0.67(0.33一1,87)。详见表1。2.LI的变化在24h,肿瘤的LI为1.72,非瘤组织为O.36(0.07一1.0)。在72h,肿瘤的LI为26.74,非瘤组织为0.22(0.05一1.0)。详见表2。3.放射免疫显像131I-McAb3D3组在24一120h之间肿瘤部位均出现放射性浓聚显像,随时间延长,本底逐渐减弱,及至120h本底已没有,肿瘤部位则越来越清晰,尤以72一120h的影像最为清晰(见图1)。131I-mIgG组在肿瘤区域无放射性浓聚显像,呈全身性均匀分布,且在24h后放射性明显减弱。讨论随着单克隆抗体技术的发展,用放射性核素标记抗肿瘤单克隆抗体为肿瘤的影像诊断学和导向治疗开辟了一条新的途径。体内标记抗体与肿瘤抗原的特异性结合是肿瘤定位显像的基础。本文结果表明给载人肺腺癌细胞株L342裸鼠注射131I-McAb3D3,在72h,13种器官组织的T/NT均大于3(3.26一57.54),肿瘤的定位指数为26.74,均与放射免疫显像结果相符,影像显示肿瘤的部位、大小和形状也与活体完全一致。提示McAb3D3在生物体内仍能很好地识别肿瘤和正常组织;并与肿瘤抗原特异性结合,对肺腺癌组织有较好的定向选择性。在24一120h,肿瘤部位始终有放射性浓聚,随着时间延长,周围本底基本消除(96一120h),在72一120h肿瘤影像最清晰,肿瘤部位的放射性明显高于其周围组织,提示McAb3D3在生物体内仍有较好的亲和力和做为导向治疗导弹载体的可能性。本文结果为McAb3D3的临床体内应用进一步提供了重要的生物参数,其临床体内应用研究值得深入。本课题为福建省自然基金资助课题参考文献||1.颜江华等,抗人肺癌单克隆抗体3D3的研制及其生物特性鉴定,单克隆抗体通讯1992,8(3):22一242.徐志凯编,实用单克隆抗体技术,陕西;陕西人民出版社1992第一版:P124一1253.LarsonSM,etal.Imagingofmelanomawith131I-la-beledantibodics.JNuclMed1983;24:1234.邓敬兰等.131I标记抗胃癌单克隆抗体(MG7)在荷人胃癌裸鼠体内的分布及显像研究单克隆抗体通讯1988;4(3):16一18.RADIOIMMUNOIMAGING0F131I-LABELEDMONOCLONALANTIBODY3D3INNUDEMICEBEARINGHUMANLUNGADENOCARCINOMAXENOGRAFTSYanJianghuaYangShanminSuJianghuaZhengYuChenFuYuHaoShengLongzhongCenterofXiamenUniversity,Xiamen3A61005〔Ahstract〕Themonoclonalantibody3D3(McAb3D3directedagainsthumanlungadenocareinomawith131IbyCH一Tmethod,anditsdistributionandradioimmunoimaginginthe nudemicebearinghumanadenocarcinomaL342xenograftswerestud-ied.Between24一120hrsafteri.p,administration,animageoftheconcentratingradioactivityintumorwasobtainedbythercameraanditwastheclearestduring72一120h,Where一asinjectionof131I-mlgGintothenudemiceresultedinanequaldistributioninthewholebodywithoutanyselectivity.At72hr,tumor/normaltissue(T/NT)ratiofor13Kindsofnormaltissuewereallover3,andthelo-calizationindexoftumorwas26.47.TheseresultsshowedthatMcAb3d3maybeusedinthelocalizationandtargeting treatmentofhu-manlungadenocarcinoma.Keywordslungadenocarcinoma.monoclonalantibody.nudemouse.radioimmunoimaging.##61.颜江华等,抗人肺癌单克隆抗体3D3的研制及其生物特性鉴定,单克隆抗体通讯1992,8(3):22一242.徐志凯编,实用单克隆抗体技术,陕西;陕西人民出版社1992第一版:P124一1253.LarsonSM,etal.Imagingofmelanomawith131I-la-beledantibodics.JNuclMed1983;24:1234.邓敬兰等.131I标记抗胃癌单克隆抗体(MG7)在荷人胃癌裸鼠体内的分布及显像研究单克隆抗体通讯1988;4(3):16一18.##A福建省自然基金##BRADIOIMMUNOIMAGING 0F131I-LABELED MONOCLONAL ANTIBODY3D3IN NUDE MICE BEARING HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA XENOGRAFTS Yan Jianghua Yang Shanmin Su Jianghua Zheng Yu Chen Fu Yu Hao Sheng Longzhong Center of Xiamen University,Xiamen 3A61005〔Ahstract〕The monoclonal antibody3D3(McAb3D3 directed against human lung adenocareinoma with 131I by CH一Tmethod,and its distribution and radioimmunoimaging in the nude mice bearing human adenocarcinoma L342 xenografts were stud-ied.Between 24一120hrs after i.p, administration ,an image of the concentrating radioactivity in tumor was obtained by the r cameraand it was the clearest during 72一120h, Where一as injection of131I-mlgG into the nude mice resulted in an equal distribution in the whole body without any selectivity.At 72hr,tumor/normal tissue(T/NT)ratio for 13 Kinds of normal tissue were all over 3,and the lo-calization index of tumor was 26. 47. These results showed that McAb3d3 may be used in the localization and targeting treatment of hu-man lung adenocarcinoma.