核酶Ripc催化性质的研究

A STUDY ON THE ENZYMATIC PROPERTIES OF HAMMERHEAD RIBOZYME-RIPC

本文根据Jim Haseloff和Wayne,L.Gerlach等人发表的锤头状核酶(Hammer-head structure ribozyme)基本模式,设计并人工合成了针对HBV基因转录物的核酶-Ri-pc,已在体外成功地切割了靶RNA分子。本文利用酶学研究的一般方法研究了核酶Ripe催化方面的特性。结果表明:(1)反应温度从25℃上升到37℃时,核酶作用效果略有增加;当温度上升到42℃时,作用更为明显。(2)随时间的增加,切割产物也逐渐增加,但不是线性的。可见核酶的活性随时间的增加是有所下降的。从图中估计此核酶的半衰期T_(1/2)在1小时内。(3)从核酶的动力学曲线看,在底物浓度达到8.00μmol/L时,产物浓度仍呈线性增加。如果核酶的反应动力学曲线符合米氏方程,说明在此底物浓度下,核酶未被饱和。(4)Mg^(2+)浓度从10mmol/L增加到50mmol/L时,核酶的切割效果变化不显著。

A ribozyme-Ripc targeted to HBV genome transcripts was designed according to the hammerhead modei suggested by Jim Haseloff et al. A study on the ribozyme dynamics was carried out in in vitro transcription system. The results provide a basis for the blocking of HBV replication in vivo.