CEA-EPO质粒的构建及诱导造血干细胞定向生成红细胞疫苗抗结肠癌的研究

Effects of Recombinant Adenovirus-Mediated Co-Transfection of CEA Gene and EPO Geneon Promoting Hematopoietic Stem Cell Directly Producing Erythrocyte Vaccine against Colon Cancer

目的:研究CEA-EPO质粒的构建及诱导造血干细胞定向生成红细胞疫苗抗结肠癌的研究。方法:将EPO-cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用CEA基因启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子,构建成CEA-EPO重组质粒。用含抗体CD117磁珠分离纯化和收集小鼠骨髓造血干细胞,用重组腺病毒法将CEA-EPO基因体外转染CEA-EPOmRNA基因到造血干细胞内,检测CEA-EPO基因和蛋白表达,将疫苗注入小鼠体内,进行扩增,使造血干细胞定向生成携带CEA-EPO双基因红细胞,经过提取和纯化获得CEA-EPO基因共转染红细胞疫苗,再进行双基因共转染红细胞疫苗的体外和体内实验。结果:成功收集造血干细胞,流式细胞仪分析结果表明:纯化前后有明显差异(P 3);高于其他各组的大小(P <0.05),CEA-EPO疫苗组的成活期分别为:69 &#177;6.91天,高于其他各组的大小(P <0.05);CEA-EPO疫苗组在肿瘤大小和小鼠的生存时间上,与空载组、CEA疫苗组,EPO疫苗组之间差异有统计学意义(P <0.05)。结论:携带CEA-EPO双基因肿瘤抗原的红细胞疫苗对结肠癌有明显的抗肿瘤作用,既可以诱导造血干细胞定向分化成红细胞疫苗,又可以合成肿瘤抗原的红细胞疫苗,是临床治疗结肠的重要疫苗。