摘要
目的 观察慢病毒介导shRNA沉默MYH9是否影响BMSCs的旁分泌功能.方法 将MYH9干扰序列经双酶切后与 pHBLV-U6-ZsGreen-Puro真核载体连接,在脂质体介导下将重组质粒转染293T细胞,包装产生的病毒液感染BMSCs.用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;分别用实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测MYH9 mRNA及蛋白表达;elisa检测其培养基上清液中VEGF、bFGF、ANG-1和ANG-2的含量.结果 成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和western blotting结果显示两条慢病毒感染组MYH9mRNA表达水平明显下调,显著低于对照组和空载组 (P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05).结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro 慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响.
出处
《中国急救医学》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第S2期1-5,共5页
Chinese Journal of Critical Care Medicine
基金
国家自然科学基金
