淹涝和低温胁迫对小麦幼根ADH与BADH表达的影响

测定淹涝和低温胁迫下小麦幼根中乙醇脱氢酶(ADH)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)表达变化。扬麦13号种子,种植于花盆土壤中,待幼苗生长至1 cm左右时,随机分为对照组、淹涝胁迫组和低温胁迫组,对照组和淹涝胁迫组均置25℃植物培养箱中,其中淹涝组淹没于水中;低温组置5℃植物培养箱中,光照/黑暗12 h交替,每日适量浇水。各组分别在0 h、12 h、1 d、2 d、4 d和8 d时取根,剪取根尖处1 cm组织,提取总RNA,逆转录,荧光定量PCR法测定ADH2a和BADH表达。结果显示:低温和淹涝对ADH表达均具有极为显著的刺激作用,且淹涝胁迫的作用又远大于低温胁迫;低温对BADH表达的刺激作用主要表现在1 d时,淹涝对BADH表达在2 d和4 d时表现出较为显著的抑制作用;小麦ADH和BADH在低温和淹涝胁迫下表达变化可能与抗逆性有关。

通粳1号水稻乙醛脱氢酶基因的克隆及原核表达

目的:克隆通粳1号水稻乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因,并在大肠杆菌中进行体外表达。方法:提取通粳1号水稻幼根总RNA,RT-PCR法扩增ALDH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pET5a表达质粒中,转化BL21(DE3)宿主菌,平板培养筛选,挑取阳性菌落并提取质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。含重组质粒的BL21(DE3)进行常规LB扩大培养,用不同浓度的IPTG作用不同时间进行诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果:质粒中插入的ALDH片段为1668bp,含有完整的开放阅读框架,序列与GenBank比较无差异,插入方向正确无误,表达蛋白分子量为61.8kDa左右,符合预期值,IPTG最佳诱导时间为3h,0.1mmol/L～0.8mmol/L浓度的IPTG作用效果无显著差异。结论:该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ALDH的作用和应用生物工程法大量获得ALDH奠定基础。

水淹胁迫对棉花幼根ADHa与BADH表达的影响

研究了盆栽棉花幼根在不同时间(0h,12h,1d,2d,4d和8d)水淹胁迫环境下乙醇脱氢酶(ADHa)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因相对表达量的变化,结果表明:与对照(0h)组比较,水淹对ADHa表达在各时间段均具有极为显著的刺激作用;BADH表达在12h、1d和8d时,表达变化不显著,2d和4d表达受到显著抑制。

淹涝和低温胁迫对小麦幼根BADH表达的影响

为测定淹涝和低温胁迫下小麦幼根中甜菜碱醛脱氢酶基因BADH表达的变化,将扬麦13种子种植于花盆土壤中,待幼苗生长至1cm左右时,随机分为对照组、淹涝胁迫组和低温胁迫组。对照组和淹涝胁迫组均置于25℃植物培养箱中,其中淹涝胁迫组将花盆置于水中;低温胁迫组置于5℃植物培养箱中。各组均处于光照/黑暗12 h交替,对照组和低温胁迫组每日适量浇水。各组分别在0 h、12 h、1 d、2 d、4 d和8 d时取根,剪取根尖处1 cm组织,提取总RNA,逆转录,荧光定量PCR法测定BADH表达。结果表明,低温对BADH表达的刺激作用主要表现在12 h和1 d,表达量分别是对照的2.9倍和16.0倍;淹涝胁迫组在1 d表达升高,在2 d和4 d表现出显著的抑制作用。小麦BADH表达的变化可能与低温抗逆性有关,而与淹涝抗逆性关联不显著。

农杆菌介导的柳枝稷遗传转化体系的优化

【目的】为建立农杆菌介导的柳枝稷高效再生及遗传转化体系。【方法】试验以柳枝稷品种Alamo、Performer及Blackwell的成熟种子为外植体诱导愈伤组织。愈伤诱导6周后,借助解剖镜观察愈伤形态,去除愈伤组织外层含水量大、海绵状愈伤组织,挑选位于愈伤组织中心位置的核状、紧实型愈伤置于继代培养基培养。暗培养3周后,在解剖镜下挑选结构松脆、生长旺盛的愈伤组织按细胞系继代增殖培养。该类愈伤组织易于分化,属单子叶植物愈伤组织分类中的第Ⅱ型。经两次继代增殖培养后,可以获得足够的愈伤组织进行再生和遗传转化研究。为优化柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的农杆菌侵染流程,试验比较了3种农杆菌侵染流程下的转基因效率。真空和干燥处理(VD):将装有愈伤组织及菌液的50 m L离心管置于真空泵中抽真空10 min(压力-0.8 MPa),28℃,80r/min慢摇20 min后弃菌液,将愈伤组织堆放于3层滤纸上干燥处理2 h,随后将愈伤组织转入含有500μL无菌水的2层滤纸上进行共培养;冷处理加真空和干燥处理(CVD):侵染前将愈伤组织置于3%麦芽糖、300μmol·L-1谷氨酰胺(Gln)溶液中冰浴20 min,然后依VD流程侵染,共培养阶段用MP培养基代替无菌水;渗透冷处理加真空和干燥处理(PVD):用6%的麦芽糖溶液替代CVD中3%麦芽糖溶液。通过比较Gus染色及PCR阳性率来评价三种方法的转化效率。【结果】愈伤挑选方法不仅从柳枝稷低地型品种中挑选得到再生率达95%以上的Ⅱ型愈伤细胞系,也首次获得高地型品种Blackwell的Ⅱ型愈伤组织,分化率达50%。不同转化方法评价过程中发现,低地型品种AlamoⅡ型愈伤组织采用CVD农杆菌侵染流程转化效率最高,达72%,显著高于侵染流程VD(53%)和PVD(44%)。应用CVD转化法,Performer转化率达96%;首次成功进行了高地型品种Blackwell的遗传转化,转化效率为5.6%。【结论】本研究建立了借助解剖镜挑选柳枝稷易于再生的Ⅱ型愈伤组织的方法,该方法适用于柳枝稷不同生态型品种;农杆菌转化过程中采用CVD侵染流程可显著提高转基因效率。本研究首次报道了柳枝稷Ⅱ型愈伤组织的挑选流程,建立了适合不同生态型柳枝稷的高效再生及遗传转化体系,首次获得高地型品种Blackwell的转基因植株,为柳枝稷遗传改良及其功能基因研究奠定基础。该方法也适用与其他难于再生的单子叶植物再生及遗传转化体系的建立。

盐胁迫对水稻幼根乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因表达的影响

以水稻(Oryza sativa)南粳44号为材料,研究不同浓度NaCl胁迫对水稻幼根中乙醇脱氢酶(ADH3)和乙醛脱氢酶(ALDH)基因表达的影响。结果表明,NaCl浓度和胁迫时间都对ADH3和ALDH的表达有影响。与对照相比,100 mmol/L NaCl胁迫后ADH3和ALDH的相对表达量下降或没有显著变化;而300、400 mmol/L NaCl胁迫12、192 h时ADH3和ALDH的相对表达量极显著高于对照,胁迫48 h时这两个基因的相对表达量则显著或极显著低于对照。

生活污水对人外周血淋巴细胞的遗传毒理作用

本文以人的外周血淋巴细胞为材料,观察了生活污水对姐妹染色单体交换(SCE)的诱导作用.实验证明以稀释10倍、100倍的生活污水处理培养的外周血淋巴细胞,其SCE出现的频率高于作为对照培养的外周血淋巴细胞,经统计两者差异极其显著.本研究证实生活污水对人体细胞具有明显的遗传毒理作用.

淹涝胁迫对幼苗期大豆根系乙醇脱氢酶1基因和乙醛脱氢酶7基因表达的影响

以通豆7号的种子为材料,在常规花盆土壤中种植发芽,待子叶刚破土时,随机分为对照组和试验组,分别置于常规和水淹环境下,分别在0、24、48、72、96 h时取根尖组织,并提取RNA,用逆转录、荧光定量PCR法测定ADH1和ALDH7的表达。结果显示:ADH1和ALDH7的表达均呈现先降后升再降的变化趋势;试验组的表达量与对照组的表达量有显著差异。表明大豆的ADH1和ALDH7在淹涝胁迫条件下表达量的明显变化与淹涝抗逆性的影响有密切关系。

通育粳1号水稻乙醇脱氢酶基因克隆与原核表达

克隆通育粳1号水稻乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)基因,并在原核系统中进行体外表达。取通育粳1号水稻幼根,提取总RNA,RT-PCR法扩增ADH基因开放阅读框架片段,双酶切后连接至pGEX-4T-1表达质粒中。将质粒转化至BL21(DE3)宿主菌中,平皿培养,挑取阳性菌落培养,提取重组质粒,酶切、电泳鉴定插入片段并测定其序列。pGEX-4T-1-ADH/BL21进行常规LB扩大培养,IPTG(1 mmol/L)作用2、3和4 h诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。结果显示,插入质粒中的ADH片段序列和方向正确无误,表达蛋白分子量符合预期值42 kD,表达至最大值的诱导时间为3 h。因此,该基因的成功克隆和表达为进一步研究水稻中ADH的作用和应用生物工程法大量获得ADH奠定基础。

低温胁迫下水稻幼根乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶基因表达变化

为研究低温胁迫下水稻幼根中乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)基因表达变化,选取南粳44号水稻种子,常规促发芽,待幼根发至长1cm时,将其随机分为对照组和试验组,分别置于25℃和5℃环境下,两组均分别在0、6、12、24、48、96 h取根,提取RNA,逆转录,用荧光定量PCR法测定ADH和ALDH基因的表达量。结果显示ADH和ALDH表达量均呈现出先降后升的变化趋势;试验组的表达量均显著高于对照组。结果表明水稻ADH和ALDH在低温胁迫下表达量升高可能与低温抗逆性有关。

低温胁迫对幼苗期棉花根系ADHa与BADH表达的影响

海棉7124号棉花种子在常规花盆土壤中种植发芽,待棉花幼苗长至2叶1心时,将其随机分为对照组和试验组,分别置于常温(25℃)和低温(5℃)植物培养箱中,光照/黑暗12 h交替培养,每天适量浇水。各组分别在0、12、24、48、96 h取根尖组织,并提取RNA,以逆转录、荧光定量PCR法测定亚型乙醇脱氢酶(ADHa)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的表达。结果显示,在各时间点下,低温组ADHa和BADH表达量均明显高于常温组。说明幼苗期棉花根系ADHa和BADH表达量在低温胁迫条件下升高与低温抗逆性有关。

农村女大学生就业状况及原因探析

近年来就业形势的紧张,大学生就业难的问题已经引起社会的广泛关注。然而,处于"来自农村"和"身为女性"的双重枷锁下的农村女大学生越来越成为就业边缘化的特殊群体。对当前农村女大学生的就业进行分析,发现当前我国的来自农村的女大学生就业存在很大的问题,讨论其原因。

比较马克思、韦伯、杜尔凯姆在社会学史上贡献

马克思、韦伯、杜尔凯姆作为19世纪末20世纪初社会学形成时期的代表人物，对社会学的发展作出了重大贡献，然而由于他们代表的是不同的流派（分别代表了批判社会学、理解社会学、实证主义社会学），因而他们对社会学作出的贡献是不同的，本文主要是对他们在社会学史上贡献进行比较。

紫花苜蓿MsCCD4基因克隆及耐盐功能鉴定

为验证紫花苜蓿(Medicago sativa L.)胡萝卜素裂解双加氧酶(Carotenoid cleavage dioxygenase,CCD)基因的耐盐功能,本试验克隆了紫花苜蓿MsCCD4的CDS全长序列,并以其叶片为试验材料,通过发根农杆菌介导的毛状根诱导法获得过表达MsCCD4的转基因毛状根,验证过表达MsCCD4对紫花苜蓿耐盐性的影响。结果表明:MsCCD4为稳定的酸性亲水蛋白质,二级结构以无规则卷曲为主,C-端含有RPE65保守结构域;MsCCD4启动子区含有光响应、激素应答和非生物胁迫响应结合元件;盐胁迫可诱导MsCCD4表达量升高;盐胁迫生理实验证明,过表达MsCCD4可以增强毛状根的耐盐性。本研究为紫花苜蓿耐盐遗传改良提供基因资源及耐盐基因快速鉴定方法。

不等式常见错例及成因剖析

在高中数学教学阶段,不等式是形式上比较灵活,内容上比较丰富的一章节,同时也是学生作业中出现问题较多的章节.本文将学生作业中出现的常见错误及其成因,归纳分析如下.一、对字母之间的联系缺乏足够的认识,使字母范围扩大错因：由于a与b是互相联系、相互制约的,在求解这类未知数相关联问题的范围时,多次使用不等式相加的性质,会导致所求变量的范围改变,出现错误.

miR396-MsGRFs参与调控紫花苜蓿愈伤组织再生

紫花苜蓿(Medicago sativa L.)愈伤组织再生率受基因型限制,是影响苜蓿遗传转化效率的主要因素之一。研究发现,GRF转录因子家族基因在提高多种植物愈伤再生中起着重要促进作用。本试验以拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtGRF序列为模板,在紫花苜蓿基因组序列中查找,获得了含有miR396靶点的9个MsGRFs基因。除MsGRF3a和MsGRF4a外,其余7个MsGRFs在紫花苜蓿胚性愈伤组织中的表达量均显著高于非胚性愈伤。为了进一步研究MsGRFs对紫花苜蓿愈伤再生效率的影响,我们在紫花苜蓿中转入MIM396基因,降低miR396的表达。结果显示:MIM396植株叶片愈伤组织再生时间显著缩短,再生率显著提高;与野生型愈伤组织相比,在MIM396植株叶片诱导的愈伤组织中,除MsGRF3a外,其余MsGRFs显著高表达。以上研究表明,miR396-MsGRF通路对苜蓿愈伤组织再生起着重要调控作用,这为提高苜蓿再生效率,并打破基因型对不同苜蓿品种再生的限制提供候选基因。

初中写作有效课堂模式探究

《语文新课标》引导下,系统的写作教学策略,有效的课堂模式,将有助于化解当前背景下写作教学的尴尬境地,使学生有序地掌握写作技巧,驱动内在的写作激情。年年岁岁花相似,岁岁年年考不同。可以说,语文试题中,最让学生、老师抓狂的便是占据半壁江山的写作。正所谓,成也萧何败也萧何,怎么办?依然还是在临考前大海捞针,抱抱佛脚来抚慰惶恐的心灵吗?不!随着中高考改革,写作教学已被推至一个新的高度,那么,如何从根本上去解决学生怕写作的境地已再次成为众人瞩目的焦点。在此,我想谈谈个人的看法:一、构建系统,螺旋上升作为教师,应当认真研读《语文新课标》,以学生的认知水平为抓手,构建中学期间一个完整的作文教学体系,并以螺旋上升的方式,将每个学段的作文教学内容,细化成多个子课题,由易到难,由浅入深,循序渐进地进行写作指导。比如初一上阶段,考虑中小学衔接,可结合单元教学,从叙事思路清晰、叙事一波三折、紧扣中心、人物外貌描写等角度入手进行写作指导;初一下阶段紧承细节描写,拓展动作语言方面,再从选材、布局等方面细化辅助。我想如此构建,教学思路不清晰都难。当然,如果可以的话,最好将写作独立出来,构建螺旋教学系列,纳入日常教学范畴,引起各方位的足够重视,切实将利益落实到学生身上。

语文教师的教学吸引力探微

语文教学吸引力是一名语文教师专业素养的集中反映,具体体现在教学的广度、深度、温度以及教学方法的灵活性和课文解读的个性化等方面。语文教师应合理拓展教学广度,深化教学深度,提升教学温度,不断摸索灵活多样的教学方法,增强课程意识,提高专业素养,充分发挥的学习自主性,才能不断提高教学吸引力,提升教师个人魅力,进而提升教学质量。