不同品种猪肌肉组织miR-1和miR-133基因的表达分析

本研究旨在探讨猪miR-1和miR-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测miR-1和miR-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的表达情况。结果表明,在蓝塘猪中,miR-1的表达量分别为长白猪和大花白猪的4.7和6.4倍,前者与后两者之间表达水平有显著的差异(P<0.05),而后两者之间表达量差异不显著(P>0.05);同样,miR-133在蓝塘猪中的表达量最高,其次为长白猪,两者分别是大花白猪的7.2和5.7倍,且差异显著(P<0.05),但蓝塘猪与长白猪之间差异不显著(P>0.05)。miR-1和miR-133在不同品种猪中存在特异性表达,提示可能与肌肉发育性状相关。

中国部分地方鸡种B-LⅡβ(β_1外显子)基因分子遗传多态性研究

应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ方法对１０个鸡种的Ｂ－ＬⅡβ（β１外显子）基因进行分子遗传多态性研 究，综合４种限制性内切酶的酶切情况，共检测到３７种基因组合型，并且在个体间以及品种间 的基因型频率、基因组合型频率都存在较大的差异。同时各酶切位点的Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡状态在品种上也表现不一致。克隆测序结果表明：β１外显子分子遗传多态性更多地体现在氨 基酸水平，作为抗原结合区，其丰富的多态性与抗原多样性相一致。

辣木叶粉对蛋鸡生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响

试验旨在研究辣木叶粉对蛋鸡生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响。试验选用160只29周龄的健康矮脚杏花蛋鸡,随机分为4组,每组5个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,处理组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别用2%、4%、8%的辣木叶粉替代等量基础饲粮饲喂蛋鸡,预试期1周,正试期5周。结果表明:辣木叶粉对蛋鸡的平均蛋重影响不显著(P>0.05),2%的辣木叶粉组蛋鸡产蛋率显著降低(P<0.05),但4%和8%的辣木叶粉组产蛋率影响不显著(P>0.05);辣木叶粉对鸡蛋的蛋壳强度、蛋白高度、哈氏单位、蛋形指数和蛋黄率的影响都不显著(P>0.05),4%的辣木叶粉组蛋黄颜色显著提高(P<0.05),8%的辣木叶粉组蛋黄颜色极显著提高(P<0.01);辣木叶粉对蛋黄的卵磷脂、总胆固醇和粗蛋白质含量的影响都不显著(P>0.05),4%的辣木叶粉组鸡蛋蛋黄粗脂肪含量显著或极显著提高(P<0.05、P<0.01),8%的辣木叶粉组鸡蛋蛋黄粗脂肪含量极显著提高(P<0.01);辣木叶粉在一定程度上能降低蛋鸡血清中的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和血清总胆固醇(TC)浓度,其中8%的辣木叶粉组血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血清总胆固醇(TC)浓度显著降低(P<0.05)。结果提示,辣木叶粉对蛋鸡的生产性能、蛋品质、蛋黄营养成分和血清生化指标无不良影响,同时能显著提高蛋黄颜色和降低血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度。辣木叶粉对改善蛋品质,开发饲料资源具有积极意义。

GDF9下调转基因小鼠模型对繁殖与生长的影响

本研究旨在对转GDF9shRNA基因小鼠进行扩群繁殖,统计分析转基因小鼠的产仔数及增重,检测GDF9shRNA、GDF9表达水平以及血清中FSH和GH的水平,以观察GDF9的下调对转基因小鼠繁殖性能及生长发育的影响。通过RT-PCR方法,分别检测了GDF9shRNA在体内的表达,以及下丘脑、垂体和卵巢中GDF9mRNA表达水平;同时用ELISA检测了血液中FSH和GH水平。结果表明,扩群后得到16只GDF9shRNA阳性小鼠,转基因GDF9shRNA在小鼠体内广泛表达,转基因小鼠的产仔数与野生型小鼠相比差异显著(P<0.05);转GDF9shRNA阳性公鼠的体重比阴性公鼠高,且在第7周差异显著(P<0.05),而母鼠间体重无显著差异;与阴性小鼠相比,转GDF9shRNA阳性小鼠GDF9基因的表达量在下丘脑、垂体中分别下降35.4%和39.8%,差异显著(P<0.05),在母鼠卵巢中表达水平差异不显著(P>0.05);阳性母鼠血液中FSH水平比阴性母鼠高55%,差异极显著(P<0.01)。结果表明,GDF9基因下调可以提高动物繁殖性能,为提高大型牲畜繁殖力提供了有利的素材和靶点参考。

豉甲科及水生肉食亚目的分子系统发育学分析(昆虫纲：鞘翅目)

利用PAUP和MrBayes软件,对线粒体COⅠ基因序列3个密码子位置的数据模块分别进行了豉甲科（Gyrinidae）和水生肉食亚目（Hydradephaga）在亚科或科水平上的系统发育学分析,结果表明第二密码子数据模块获得了理想的分析结果。由PAUP生成的豉甲科最优树来自第二密码子数据模块的分析,而由MrBayes生成的最优树来自全部密码子数据模块的分析。此外,用对应的氨基酸序列生成的ME和MP树与第二密码子数据模块分析的结果也一致。亚科Orectochilinae和Gyrininae以高的支持率形成了单系。然而,来自亚科Enhydrinae的种Porrorhynchus landaisi landaisi呈现了异常的位置。SH-test检验也支持该异常位置,表明这个种可能代表了一个科。在来自第二密码子数据模块的水生肉食亚目最优ML树中,整个Hydradephaga树呈现单系,豉甲科位于树的基部,表明了该科在水生肉食亚目中是一个早期的分支。在树中还产生了一个单系的Dytiscoidea总科,由Dytiscidae、Hygrobiidae、Noteridae和Amphizoidae 4个科组成,单系的Haliplidae与之成为姐妹群。此外线粒体分子钟的结果表明豉甲科的5对相近种间的分化是一个短时期内发生的（0.01~1.81百万年前）,这点可能与它们的特殊地理分布有关。

人参多糖复合物对南美白对虾免疫增强效果的研究

以人参多糖复合物作为免疫增强剂,选取体长为(9.00±0.10)cm,体重5.00～7.00g,健康状况良好的南美白对虾为试验动物,试验组投喂添加有人参多糖复合物(0.04%)的饲料,对照组投喂基础饲料。试验期为30d,测定分析对虾肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、血清中酚氧化酶(PO)和溶菌酶(LSZ)的活力以及肌肉中丙二醛(MDA)的含量变化。结果表明人参多糖复合物对南美白对虾具有较强的抗氧化作用,可以明显提高对虾肝脏中的SOD的活力(P<0.01),第15d和第30d采样点的SOD的活力最高为25.70和11.05U/mg*prot;而人参多糖复合物对于对虾血清中PO和LSZ的活力的调节,只作用在一定的时间段(P<0.05),最高含量为第15d采样点,达11.67和18.13U/mg*prot,作用的力度随着饲喂时间的加长而降低;至于对肌肉中的MDA的含量则有一定的下降力度(P<0.05),但也只作用在一定的时间段内(第15d采样点:6.2×10-3nmol/mg*prot),作用的力度也是随着饲喂时间的加长而降低。

简论动物生物化学对营养与饲料科学的科研教学启示

动物生物化学是提高动物营养学创新能力的手段,也是动物营养研究的基础。文章从营养物质代谢,营养素与基因互作,营养物质与肉品质调控,营养基因组学,营养遗传组学,营养代谢组学,营养物质与DNA甲基化及组蛋白修饰表观遗传学,mi RNAs与肌肉、脂肪发育的关系,以及Exo-some与营养等方面的生化机制进行论述。旨在分子水平上系统认识营养素既是营养物质,也作为信号分子对基因表达、代谢途径以及性状传递的调控机制,为营养与饲料科学的发展提供有益的科研教学启示。

Bac-to-Bac系统在杆状病毒功能基因研究上的应用

利用Bac-to-Bac系统,在大肠细菌中复制增殖杆状病毒质粒bacmid,并通过RecA介导法、ET-recombination法在bacmid DNA上缺失或插入功能基因,构建功能基因缺陷型或补回型的杆状病毒质粒。该质粒转染到昆虫细胞中产生重组病毒,进而在细胞甚至虫体水平上研究基因的功能,极大改善了传统上用空斑实验筛选重组病毒的不足。

松籽多糖复合物对南美白对虾免疫功能影响的研究

南美白对虾（Penaeus Vannamei Boone）属对虾科，对虾属，自对虾亚属，1998年被引入我国，它头胸甲较小，含肉率高（53．03％-53．81％），蛋白质含量和必需氨基酸指数等营养指标均高于其他对虾，且肉质鲜美（陈琴等，2001）。近几年来南美白对虾养殖出现了严峻的挑战。细菌病、病毒病、真菌病、寄生虫病等导致大量死亡或成为病原携带者（管诗华，1999）。研究发现，肽聚糖、脂多糖、葡聚糖等微生物多糖和藻类多糖均能不同程度地提高生物机体的免疫能力，增强抗病力，

位点特异性频率模型在昆虫分子系统发育分析中的应用

根据位点特异性频率模型(site-specific rate model),利用PAUP软件,对线粒体COI基因序列不同密码子位点的数据模块分别进行了豉甲科和水生肉食亚目在亚科或科水平上的系统发育学分析,结果表明第二密码子数据模块获得的系统分析结果与形态学分析结果一致。表明位点特异性频率模型在线粒体COI基因作为标记来进行昆虫分子系统发育分析上获得了更好的效果。

猪雌激素受体基因(ESR)点突变的PCR-SSCP检测

雌激素受体基因(ESR)是控制猪高产仔数的主效基因之一,具有明显的基因效应:BB型比AA型母猪胎总产仔数和产活仔数分别高出1 40～3 37和0 63～3 58头,是目前商品猪育种和生产中重点检测的主要基因之一。常规采用PCR -RFLPs方法区分该基因由点突变造成的3种不同的基因型。本研究建立1种基于PCR的SSCP(single-strand edconformationpolymorphism)方法对猪ESR该位置的点突变进行检测,具有操作简便、灵敏度高和不需要酶切等优点 。

不同有机酸对断奶仔猪肠道厌氧培养微生物菌群的影响

【目的】建立仔猪肠道微生物菌群调控的离体模型,并研究有机酸对断奶仔猪肠道微生物菌群的影响.【方法】每次试验选取2头40日龄杜×（长×大）仔猪,屠宰后取其空肠和回肠混合食糜,按照每管300μL分装于2 m L离心管,分别添加30 mmol·L^-1不同有机酸（甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、富马酸、柠檬酸、苯甲酸、苹果酸和山梨酸）,置于厌氧工作站中,厌氧培养4 h后提取食糜中基因组DNA,应用绝对定量PCR技术测定食糜中乳杆菌属Lactobacillus、双歧杆菌属Bifidobacterium、沙门菌属Salmonella和大肠埃希菌Escherichia coli的数量变化.随后进一步选择抑菌活性较强的甲酸、乙酸、丁酸、乳酸、柠檬酸研究其抑菌活性的浓度梯度效应.【结果和结论】成功建立了体外全食糜厌氧培养体系,研究结果发现,甲酸、丁酸和柠檬酸能呈剂量依赖性地抑制细菌增殖,而乙酸对总菌数量影响不大;对益生菌而言,柠檬酸能显著抑制乳杆菌属和双歧杆菌属的增殖,但低剂量的乳酸（10 mmol·L^-1）能显著促进乳杆菌属和双歧杆菌属的增殖,且低剂量的乙酸（15 mmol·L^-1）也能促进双歧杆菌属的增殖;所选择的有机酸在浓度达到10-15 mmol·L^-1时,均能有效抑制病原菌（沙门菌和大肠埃希菌）的增殖.

饲粮中色氨酸对畜禽的免疫调节作用

色氨酸是一种具有调节机体免疫功能的必需氨基酸。色氨酸的代谢产物吲哚-2,3-双加氧酶(IDO)、犬尿氨酸、喹啉酸和褪黑激素等,可通过抑制T淋巴细胞增殖、增加血液免疫球蛋白含量和促进组织的抗原递呈等,来提高机体免疫力、抗炎症反应和影响肿瘤细胞免疫逃逸。本文就色氨酸及其代谢产物对畜禽免疫功能的调控作用和机制进行简要叙述。

FAT/CD36融合蛋白的表达及其对鸡腹脂沉积的特异性调控

【目的】脂肪酸转位酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)是介导脂肪酸跨膜转运和脂肪细胞聚脂的重要载体蛋白。本试验采用主动免疫法研究FAT/CD36在鸡脂肪沉积调控中的作用。【方法】将FAT/CD36膜外区抗原表位基因片段克隆入表达载体pET-32a(+),并转化在大肠杆菌BL21(DE3),构建FAT/CD36融合蛋白表达载体。主动免疫试验选取22日龄黄羽肉鸡60只,按公、母各随机分为2组,共4组。公鸡和母鸡的试验组分别在第34、49、和63天肌肉注射1mg重组鸡FAT/CD36融合蛋白,以牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)为对照。【结果】重组菌表达分子量约为29kD的鸡FAT/CD36融合蛋白,在0.1mmol·L-1IPTG诱导6h后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的32%。表达产物主要以包涵体的形式存在,经纯化并透析复性后得到高纯度的FAT/CD36融合蛋白。主动免疫后,公鸡和母鸡试验组的血清抗FAT/CD36抗体水平逐渐升高,并在首次免疫后显著高于各自对照组。主动免疫FAT/CD36能特异性降低公鸡的腹脂率,但对母鸡无显著性影响。试验组与对照组皮下脂肪厚度差异不显著。【结论】FAT/CD36对鸡脂肪调控具有典型的性别特异性和部位差异。试验结果为进一步阐明禽类脂肪组织特异性沉积的分子机制提供理论依据。

人参复合多糖提高猪圆环病毒疫苗免疫效果的研究

为探索人参复合多糖(GPS)对仔猪的免疫调节作用,本研究以哺乳仔猪为研究对象,选取7日龄的哺乳仔猪8窝,随机分成4组,每组2窝,分别在基础饲粮中添加100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg GPS,在PCV2灭活疫苗接种仔猪后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d,采用ELISA方法测定仔猪血清中PCV2抗体、SOD、GSH-Px和MDA含量,采用荧光定量RT-PCR法测定仔猪血液白细胞中IL-6和TNF-α的m RNA表达水平。结果表明,添加200 mg/kg GPS可以显著提高仔猪血清中PCV2抗体水平(p<0.05)。添加200 mg/kg和400 mg/kg GPS组除第7 d外,在其余检测时间点均显著促进仔猪血液白细胞中TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(p<0.05)。添加200 mg/kg GPS 42 d时能够显著提高仔猪血清中GSH-Px的活性(p<0.05),猪血清中MDA的含量在第14 d、42 d和56 d显著低于对照组(p<0.05)。本实验研究表明合适剂量GPS对PCV2疫苗的免疫效果具有明显的增强作用,同时增强抗氧化作用。

酱油渣发酵工艺及蛋白质含量变化研究

本试验旨在米曲霉发酵的基础上,应用多种复合微生物(黑曲霉、产朊假丝酵母菌和枯草芽孢杆菌)对酱油渣进行二次深度固态发酵,提高产品游离氨基酸、活性酶以及生物活性小肽,改良产品的适口性和营养价值,生产高附加值的动物蛋白饲料替代产品。以黑曲霉、产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌为候选菌株,以粗蛋白质和酸溶蛋白为指标,分别研究不同底物组成、底物含水量、总接种量、温度及时间对发酵效果的影响,确定最优发酵工艺参数。与发酵前相比,粗蛋白质、酸溶蛋白含量提高;优良菌株组合发酵效果最优:粗蛋白质含量提高了7.35%(P<0.05),酸溶蛋白含量提高了24.44%(P<0.05);最优发酵工艺为:料水比1∶1.0,接种量10%,温度30℃,发酵时间60 h,厌氧发酵24 h,自然p H得到发酵蛋白饲料产品粗蛋白质含量49.44%,酸溶蛋白含量19.89%。本研究为提高酱油渣在饲料中的利用价值打下了基础。

精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备

【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为:100μL慢病毒原液(5×105cfu)与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子(109个/mL)给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件(100μL慢病毒原液(5×105cfu)与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min),成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。

生长抑素受体的生理功能及动力学特征

生长抑素受体家族(somatostatin receptors,SSTRs)是一类介导生长抑素及其类似物,具有多种生物学效应的G蛋白偶联受体家族,其生理功能和作用机制长期以来倍受关注.研究表明,这些细胞膜上存在的特定膜受体包括SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4以及SSTR5,可以通过cAMP、PTP和MAPK信号通路,在调控GH分泌、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增生、抑制胰岛素作用和抑制细胞生长等生物学过程发挥重要的作用,同时表现出与其它G蛋白偶联受体性质相似的动力学特征.本文将SSTRs的结构、分布和生理功能、配体选择性、下游信号通路,以及该受体家族的动力学特征最新研究进展作一综述.

木本饲料研究进展

在我国传统饲料资源日趋紧张的现实情况下,木本饲料作为一种待开发的饲料资源,日益受到研究者们的重视。开发利用木本植物饲料资源,对促进我国畜牧业稳定发展意义重大。对国内外木本饲料的发展和利用现状进行总结;综述木本饲料的特点、营养价值及在草食动物、单胃动物和水产动物上的饲喂效果,旨在为木本饲料的研究和开发提供参考依据。

miR-130a在猪皮下脂肪细胞分化中的调节作用

为研究miR-130a对猪皮下脂肪细胞分化的影响及可能机制,本试验分离猪皮下脂肪前体细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞,检测脂肪细胞分化过程中脂滴变化及miR-130a及其可能靶基因TNF-α和PPARγ的表达模式.同时合成miR-130a mimics及inhibitor对细胞进行转染,并以乱序序列作为阴性对照(NC).细胞转染24 h后进行诱导分化,连续诱导8 d,检测各处理细胞的聚脂情况及甘油三酯含量变化,荧光定量PCR检测脂肪细胞分化相关基因的表达变化.结果显示,猪皮下脂肪前体细胞分化过程中脂滴逐渐变大增多,miR-130a、TNF-α和PPARγ的表达模式具有一定的相似性.转染结果显示,相对于对照组,miR-130a mimics转染组细胞脂滴减少变小,甘油三酯含量降低(P<0.05),脂肪细胞分化相关基因LPL、PPARγ、adiponectin、FASN和葡萄糖转运相关基因GLUT1,GLUT4以及JNK通路上的PDE3B的表达均比对照组显著下调(P<0.01);而miR-130a inhibitor转染组细胞则脂滴增多,甘油三酯含量提高(P<0.05),但大部分分化相关基因的表达与对照组无显著差异,提示miR-130a可能不只通过单一的靶基因影响脂肪细胞分化.其结果为后续深入研究miR-130a调节猪脂肪细胞分化的通路及机制奠定基础.