PI3K/Akt信号通路在肾小球足细胞损伤凋亡中的作用机制

目的:初步探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在肾小球足细胞损伤凋亡中的作用机制。方法:采用荧光定量PCR技术、免疫印迹(Western blot)技术及激光共聚焦技术检测肾小球足细胞凋亡相关蛋白的表达和分布情况,流式细胞仪检测肾小球足细胞凋亡率。结果:嘌呤霉素核苷酸(PAN)损伤足细胞后CD2相关蛋白(CD2AP)分子的表达明显降低,与p85的共定位异常;给予地塞米松(DEX)干预后,CD2AP的表达及分布趋于正常,足细胞磷酸化Akt(p-Akt)及磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)的表达与PAN浓度依赖性的下降,给予DEX干预后,p-Akt及p-GSK3β的表达逐渐恢复;PAN损伤足细胞后,其凋亡率明显升高,DEX干预后凋亡率较PAN组降低(P<0. 05)。结论:PI3K/Akt信号通路在肾小球足细胞凋亡中发挥了重要作用,而糖皮质激素可能通过稳定PI3K/Akt信号通路发挥保护肾小球足细胞作用。

他克莫司通过稳定CD2AP表达治疗肾病肾小球硬化的分子机制

目的探讨他克莫司治疗肾病肾小球硬化的分子机制,以及其对足细胞相关分子CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法选取30只SD大鼠,随机分为正常对照组(Con组)、嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型组(PAN组)以及他克莫司组(FK组),每组10只。除Con组,其余2组均给予一次性腹腔注射PAN制备肾病肾小球硬化模型,模型制备成功后,FK组予他克莫司0.5mg/(kg·d)灌胃。给药10d后检测3组大鼠尿蛋白及血生化指标,收集3组大鼠肾脏组织,光学显微镜下观察大鼠肾脏组织染色的病理形态学改变,并使用蛋白免疫印迹法检测3组肾脏组织CD2AP的相对表达量。结果成功制造肾病肾小球硬化模型,与Con组比较,PAN组、FK组大鼠均出现大量蛋白尿且血清白蛋白、总胆固醇升高(P均<0.05)。与PAN组相比,FK组的尿蛋白定量、血清白蛋白及总胆固醇均有所降低(P均<0.05)。Con组肾小球及肾小管间质结构正常,毛细血管无淤血,肾小管腔内未见管型。PAN组大鼠肾脏可见肾小球毛细血管袢的管腔闭塞、基质增多以及球囊粘连,部分肾小球可见节段性硬化。FK组大鼠肾脏病理改变轻于PAN组。Con组、PAN组、FK组的肾脏组织CD2AP蛋白的相对表达量分别为1.46±0.31、0.72±0.15、1.04±0.23,其中PAN组低于Con组、FK组高于PAN组(P均<0.05)。结论CD2AP在PAN肾病大鼠肾脏组织的表达减弱,他克莫司可有效稳定肾脏组织CD2AP的表达,减轻肾损伤程度。

儿童复杂性先天性心脏病致肾脏损害2例报告

目的关于复杂性先天性心脏病致肾损害近年来有增加趋势,提高对儿童复杂性先天性心脏病致肾损害的认识,尽量避免心脏根治手术前后肾损害发生。方法对2例复杂性先天性心脏病致肾损害患儿的临床、实验室资料及诊疗经过进行分析,并复习相关文献。1例6个月患儿为法洛四联症;1例3岁患儿为右室双出口、大型房间隔缺损及室间隔缺损,心脏根治术后发生急性肾衰竭,对此高危因素应高度重视,积极治疗。结果此2例复杂性先天性心脏病患儿术后出现肾功能衰竭、大量蛋白尿,伴高尿酸血症、继发性贫血。经适当治疗,限制液体入量,降低血液粘滞性等,肝素抗凝,低分子右旋糖苷改善微循环、降低血液粘滞性、纠正酸中毒、别嘌呤醇治疗高尿酸血症,纠正急性肾衰竭,病情好转出院。结论儿童复杂性先天性心脏病可致肾损害,术后容易发生急性肾衰竭危及生命,对其肾损害发生应充分重视,以减少心脏根治术后急性肾衰竭的发生。通过本例报告及文献复习,应认识到术前应明确有无肾损害发生,一旦发生肾损害,加强尿检及肾功能监测,并保证充足的液量及积极的利尿治疗,从而降低心脏手术后发生急性肾衰竭的危险性。

咪唑立宾治疗儿童激素依赖性肾病综合征的疗效观察

目的观察分析咪唑立宾治疗儿童激素依赖性肾病综合征的临床疗效。方法 10例激素依赖性肾病综合征患儿入院后口服咪唑立宾,剂量为5 mg/(kg.d),疗程3个月,同时联合标准激素治疗1.5 mg/(kg.d)。治疗前及治疗后8、12周观察24 h尿蛋白定量、血浆白蛋白、血浆胆固醇、血肌酐、尿素氮等指标。10例中8例行肾活检,了解病理类型。结果 10例患儿经治疗后,完全缓解6例(60%),部分缓解2例(20%),未缓解2例(20%)。患儿治疗后各项生化指标均较治疗前明显好转,治疗前后结果差异有统计学意义(P<0.05)。8例肾活检病理为微小病变型2例,系膜增生性肾炎4例,局灶节段性肾小球硬化2例。结论咪唑立宾联合激素能有效治疗儿童激素依赖性肾病综合征,值得临床应用。

细菌溶解产物在预防儿童肾病综合征频繁复发中的应用

目的观察细菌溶解产物(泛福舒)对预防儿童原发性肾病综合征(PNS)频繁复发的疗效,探讨其临床应用价值。方法选择诊断为PNS频繁复发型患儿50例,将其分为两组,对照组(22例)给予常规的泼尼松和(或)免疫抑制剂等综合治疗,观察组(28例)在常规的泼尼松和(或)免疫抑制剂治疗的同时加用泛福舒口服治疗6个月,观察6个月内两组患儿呼吸道感染次数、因呼吸道感染引起肾病复发次数以及尿蛋白由阳性转为阴性的时间。两组患儿在治疗前及治疗6个月后分别抽血查T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及免疫球蛋白Ig A、Ig G、Ig E和Ig M的变化及服药期间的不良反应。结果观察组呼吸道感染次数、因呼吸道感染引起肾病复发次数以及尿蛋白由阳性转为阴性的时间较对照组均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组比较,治疗前各项指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后CD3+、Ig M无明显变化(P>0.05),而观察组CD4+、CD4+/CD8+、Ig A、Ig G高于对照组,CD8+、Ig E低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组PNS完全缓解15例,部分缓解10例,无效3例;对照组完全缓解11例,部分缓解6例,无效5例,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于PNS频繁复发的患儿,使用糖皮质激素和(或)免疫抑制剂治疗的同时,加用泛福舒可提高其机体免疫力,减少患儿呼吸道感染的次数,延长PNS缓解的时间,能有效预防呼吸道感染诱发的原发性肾病频繁复发及减少尿蛋白,较安全且不良反应少。

环孢素与环磷酰胺联合肾上腺皮质激素治疗婴幼儿肾病综合征的疗效评价

目的观察环孢素与环磷酰胺联合肾上腺皮质激素(激素)治疗婴幼儿肾病综合征(NS)的临床疗效。方法收集婴幼儿NS 51例,分为环孢素联合泼尼松治疗组(环孢素组)35例和环磷酰胺联合泼尼松治疗组(环磷酰胺组)16例,在口服泼尼松治疗的基础上,环孢素组口服环孢素3～5 mg/(kg·d),环磷酰胺组静脉滴注环磷酰胺10 mg/(kg·d),两组总治疗时间均为6个月。分别记录治疗前、治疗3、6个月时两组患儿的尿常规、尿蛋白定量、血浆胆固醇、血浆白蛋白、血清肌酐和血尿素氮及肝功能的变化,评价疗效,并记录不良反应。结果治疗3、6个月时,环孢素组总有效率为83%、89%、环磷酰胺组为75%、81%,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患儿各项生化指标均较治疗前好转(P>0.01),治疗3、6个月时,环磷酰胺组患儿的尿蛋白定量均低于环孢素组,血浆白蛋白高于环孢素组(P均<0.01);而环孢素组在治疗3个月时血清肌酐低于环磷酰胺组,治疗6个月时血尿素氮低于环磷酰胺组(P均<0.01)。两组总体不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05),其中环孢素组患儿面部多毛的发生率高于环磷酰胺组,而环磷酰胺组患儿胃肠道反应的发生率高于环孢素组(P均<0.01)。结论临床上对于婴幼儿NS应用环孢素联合激素或环磷酰胺联合激素治疗均可以取得良好的疗效,前者对改善NS患儿的肾功能疗效较佳,后者对改善婴幼儿NS的蛋白尿及低蛋白血症的疗效较好,临床应根据患儿个体状况选择适当的治疗药物。

自噬相关基因LC3在阿霉素肾病中mRNA表达的意义

目的探讨自噬相关基因LC3在阿霉素肾病中mRNA表达的意义及其与肾脏疾病发生发展的关系。方法模型组:建立阿霉素肾病大鼠模型12只,予尾静脉注射阿霉素6.5 mg/kg,对照组:正常大鼠12只,予尾静脉注射等量生理盐水。造模成功后分别于2、4、8周时,检测两组生化指标:血清白蛋白(Alb)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白量;采用荧光定量PCR检测LC3的mRNA表达。结果模型组随着时间延长,出现大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症、进行性肾功能损害。RT-PCR检测结果显示,模型组LC3 mRNA表达量在第2周时明显增高,随时间延长开始逐渐下降,在第4~8周表达量达到相对稳定高水平,但均低于第2周。模型组在2、4、8周各个时间点的LC3 mRNA表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论自噬的活性程度与肾组织损伤程度关系密切,自噬参与肾脏细胞的损伤修复和肾脏疾病的转归,提示通过影响自噬活性来研究和治疗肾脏疾病的一种可能性。

甘草甜素及地塞米松对体外培养足细胞增殖的影响研究

目的通过建立嘌呤霉素(PAN)诱导小鼠足细胞MPC5损伤模型,观察甘草甜素(GL)及地塞米松(DEX)对足细胞及受损足细胞增殖的影响作用,探讨GL在体外培养足细胞损伤中是否具有类似DEX的防护作用。方法体外培养小鼠足细胞,分为对照组、PAN组、GL组、DEX组、PAN+GL组、PAN+DEX组。对照组采用RPMI-1640培养液培养;PAN组加入终浓度50mg/LPAN;GL组加入不同浓度的GL,终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L;DEX组加入终浓度1μmol/LDEX;PAN+GL组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和GL(终浓度分别为50、100、200、400、600、800mg/L);PAN+DEX组同时加入PAN(终浓度50mg/L)和DEX(终浓度1μmol/L),培养24h及48h,采用MTT检测细胞的增殖活性。结果与对照组相比,PAN组24h及48h时足细胞增殖的光密度(A)值均明显降低(P<0.01),抑制率(IE)分别为55.56%、59.10%;GL组中不同浓度组24h时A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时GL50mg/L组A值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组A值较对照组均明显降低(P<0.01);低浓度GL组(100～400mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显下降,高浓度GL组(600～800mg/L)对足细胞的IE48h较24h明显升高。DEX组24、48h足细胞增殖A值较对照组均明显降低(P<0.01),48h时足细胞的IE较24h时差异无统计学意义(P>0.05)。PAN+GL组50～600mg/L浓度范围内,24h、48h时足细胞增殖A值均呈剂量依赖性升高(P<0.01),但PAN+GL组800mg/L浓度时足细胞增殖活性不再增加。PAN+DEX组24、48h时足细胞增殖A值均明显升高(P<0.01)。结论 PAN能显著抑制足细胞增殖,GL及DEX对体外培养的正常足细胞增殖有轻微抑制作用,但二者均能促进受损足细胞的增殖,且GL在一定范围内呈剂量依赖性关系,对PAN诱导足细胞损伤具有类似DEX的防护作用。

儿童激素耐药型肾病综合征TRPC6基因变异分析

目的 研究和探讨儿童激素耐药型肾病综合征(SRNS)TRPC6基因变异情况及其临床特点。方法 收集南方地区30例SRNS患儿和30例正常儿童的病例资料及外周血,提取外周血基因组DNA。PCR扩增TRPC6基因全部外显子,直接测序后与NCBI基因数据库进行比对,对两组之间基因分布差异进行统计学分析。结果 在所有受试者中均未检测到TRPC6基因的突变。3例SRNS患儿检测到TRPC6外显子7单核苷酸多态性:423C>T。两组研究对象间单核苷酸多态性的基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TRPC6基因外显子7单核苷酸多态性:423C>T可能不是本研究中SRNS患儿发病的遗传学基础。

肾病综合征患儿外周血IL-17水平检测的临床意义

目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)在激素敏感型肾病综合征(SSNS)和激素依赖型肾病综合征(SDNS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中检测的临床意义,并且阐明IL-17参与儿童NS的发病机制及临床作用。方法:选择2012年1月至2014年3月在广州市第一人民医院住院的原发性肾病综合征(PNS)患儿47例,其中,SSNS 20例,SDNS27例,并选择20例健康儿童为对照组。两组患儿治疗前和治疗4周后分别采血检测血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血和尿β2-微球蛋白(β2-MG)及24h尿蛋白定量检测。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测PBMC在植物血凝素(PHA)刺激下培养液上清的IL-17浓度,分析IL-17浓度与24 h尿蛋白定量的相关性。结果:与治疗前比较,SSNS组和SDNS组患儿的ALB、TC、TG、BUN、Scr、β2-MG以及24h尿蛋白定量水平差异有统计学意义(P<0.05);但两组间比较,以上指标差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前两组患儿IL-17的浓度均明显高于对照组(P<0.05),治疗后SDNS组IL-17浓度明显高于SSNS组与对照组(P<0.05)。直线回归分析显示,治疗前两组患儿IL-17浓度与24 h尿蛋白值呈正相关(r=0.949,P<0.01);治疗后SDNS组IL-17浓度下降值与24 h尿蛋白定量下降值呈正相关(r=0.767,P<0.01)。结论:IL-17在儿童PNS的发生发展中起着一定的作用,推测IL-17可能是引起NS患儿激素依赖的重要原因,因此监测IL-17浓度的变化可以作为观察儿童PNS疗效的一个重要临床指标。

急性肾小球肾炎的精细化营养管理

目的分析精细化营养管理对急性肾小球肾炎患者的效果。方法从广州某三甲医院2017年1月—2018年8月收治的急性肾小球肾炎患者中抽取79例,随机分成两组,40例对照组予常规护理,39例观察组在常规护理基础上予精细化营养管理,比较两组的临床效果。结果观察组BUN、24h尿蛋白、Scr水平均低于对照组;健康知识掌握评分高于对照组,有统计学差异(P<0.05);观察组压力性损伤并发症发生率低于对照组。结论给予急性肾小球肾炎患者精细化营养管理,能改善患者肾功能状况,减少并发症,改善护理结局。

熊去氧胆酸对胆汁淤积幼年大鼠Mrp2和Bsep的调控作用

目的:研究熊去氧胆酸(UDCA)对胆汁淤积幼年大鼠的治疗作用以及胆汁酸转运体多药耐药相关蛋白2(MRP2,大鼠基因表达为Mrp2)和胆盐输出泵(BSEP,大鼠基因表达为Bsep)表达的影响,探讨该药物作用的分子机制。方法:将SD幼年大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、胆汁淤积模型组(ANIT组)和熊去氧胆酸治疗组(UDCA组)。α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃法(80 mg/kg,每周1次,共2次)诱导肝内胆汁淤积大鼠模型,分别给予安慰剂对照以及熊去氧胆酸口服(100 mg/kg,qd)治疗10 d。实验第10天处死大鼠,留取血标本进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)检查,肝脏标本分别行组织病理学检查、免疫组化以及荧光定量RT-PCR检查胆汁酸转运体Mrp2和Bsep的分布以及RNA表达情况。结果:UDCA组与ANIT组比较,ALT、DBIL和TBA水平明显下降(分别为153 U/L vs 203 U/L、7 mmol/L vs 16 mmol/L、28 mmol/L vs 51 mmol/L,P<0.05),病理损害减轻,Mrp2和Bsep表达增强。结论:熊去氧胆酸能改善胆汁淤积幼年大鼠肝脏功能,减少肝细胞损害以及炎症渗出,上调胆汁酸转运体Mrp2和Bsep的表达。

儿童肾脏病相关基因筛查的进展

近年来,随着人类对儿童肾脏病特定致病基因的深入研究,越来越多的致病基因被检测,这些基因被敲除或破坏时对肾脏病的发生发展产生重要影响。基因检测是在DNA水平或mRNA水平来鉴定个体是否携带致病基因的方法。目前突变基因分析和连锁分析是最常见的两种基因检测的方法。

地塞米松对嘌呤霉素损伤足细胞nephrinmRNA表达的影响及意义

目的观察嘌呤霉素（PAN）和地塞米松（DEX）干预后足细胞形态及nephrinmRNA表达变化，探讨DEX保护PAN诱导体外培养足细胞损伤的作用机制。方法将体外培养的小鼠肾小球足细胞分为三组，分别为对照组、PAN组和DEX组。对照组加入等体积RPMI-1640培养液培养；PAN组加入PAN（终浓度50mg／L）；DEX组同时加入PAN（终浓度50mg／L）和DEX（终浓度1mmol／L）。培养8h、24h和48h后，相差显微镜下观察足细胞形态变化；用图像处理软件分析各组细胞胞体面积的差异。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测培养24h、48h时足细胞nephrinmRNA表达。结果对照组足细胞形态正常，细胞胞体较大，可见树枝样突起及细胞间形成相互连接；PAN诱导足细胞损伤8h、24h和48h时，足细胞面积均较对照组明显缩小，分别为对照组的75％、46％和27％（P〈0．01），足细胞足突及细胞间连接消失。DEX组在干预8h、24h和48h时，足细胞胞体面积均明显大于PAN组（P〈0．01），部分足细胞可见足突及细胞问连接。PAN组足细胞培养24h和48h时，nephrinmRNA表达较对照组明显下降（P〈O．01）；DEX组干预后24h及48h，足细胞nephrinmRNA表达均较PAN组显著升高（P〈0．01）。结论DEX对PAN诱导足细胞损伤具有保护作用，其作用机制可能与上调足细胞分子nephrinmRNA表达有关。

连续个性化追踪对农民工新生儿遗传性肾小球疾病肾功能恢复的影响

目的探讨连续个性化追踪对农民工新生儿遗传性肾小球疾病肾功能恢复的效果。方法将76例农民工新生儿遗传性肾小球疾病患儿及其家长均分为两组,对照组进行常规电话回访及定期来院复查,观察组由责任护士以连续个性化追踪形式进行延续护理服务。结果 6个月后,观察组患儿的Cys C、Urea、SCR水平显著低于对照组,观察组家长对健康教育内容的知晓率、对延续护理服务的满意度均显著高于对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论连续个性化追踪可以提高家长依从性、护士执行力及家长满意度,有利于患儿肾功能的恢复。

环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿肾病综合征的疗效评价

目的探讨环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)的临床疗效。方法对2010年1月至2014年12月在本科收治住院的NS患儿61例进行回顾性分析,选取环磷酰胺联合泼尼松治疗的患儿29例作为治疗组,仅应用泼尼松治疗的患儿32例作为对照组。随访观察6个月,统计并分析治疗前和治疗6个月时两组患儿24小时尿蛋白定量等各项生化指标变化,并记录不良反应。结果治疗6个月时,治疗组24小时尿蛋白定量等各项生化指标较对照组降低,差异有显著性(P<0.05)。治疗组完全缓解18例,部分缓解4例,有效率76%,对照组完全缓解9例,部分缓解6例,有效率47%,两组有效率差异有显著性(P<0.05)。治疗组感染性疾病发生率明显少于对照组,但胃肠道反应发生率高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿NS比单用泼尼松缓解率高,感染性疾病的发生率低,值得临床推广及应用。

他克莫司与环磷酰胺治疗儿童激素依赖/频复发型肾病综合征的效果比较

目的比较口服他克莫司(FK506)与环磷酰胺(CTX)静脉冲击治疗儿童激素依赖型肾病综合征(SDNS)/频复发型肾病综合征(FRNS)的临床效果及安全性。方法将38例SDNS/FRNS患儿分为FK506组21例和CTX组17例。FK506组在口服泼尼松基础上,加FK506口服,CTX组在口服泼尼松基础上,加CTX静脉冲击治疗。随访观察至少1年,比较两组治疗前后的复发频率、激素剂量的变化以及治疗6、12个月时各项生化指标的变化,并记录其不良反应。结果 (1)FK506组复发频率由(5.7±2.8)次/年降至(1.2±0.7)次/年,激素剂量由(37.9±15.3)mg/d降至(14.6±8.3)mg/d(P<0.01);CTX组复发频率由(4.8±2.5)次/年降至(1.0±0.6)次/年(P<0.01),激素剂量由(35.3±14.2)mg/d降至(12.4±7.8)mg/d(P<0.01);(2)两组患儿在治疗6、12个月时的各项生化值均较治疗前好转,差异有统计学意义(P<0.05),而同时间点组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)FK506组2例患儿出现轻度胃肠道反应,CTX组4例患儿有不同程度胃肠道反应,1例外周血白细胞轻度下降,1例转氨酶轻度升高,给予对症处理后均好转,两组均未见严重感染。结论在治疗SDNS/FRNS中FK506与CTX在降低复发频率、协助激素减量等方面疗效相似。鉴于FK506治疗效果好、不良反应少及对性腺无损害的优势,尤其是青春期阶段的患儿,考虑选择FK506替代CTX治疗。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的肾小球足细胞重组人帕金森蛋白7表达的影响

目的探讨嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)对小鼠肾小球足细胞(mouse podocyte clone 5,MPC-5)凋亡及重组人帕金森蛋白7(Parkinson's disease 7,Park7)表达的影响,以及他克莫司(tacrolimus,FK506)对MPC-5损伤的保护机制。方法体外培养MPC-5,分为空白对照组(对照组)、PAN组和FK506组。PAN组滴加PAN(浓度50 mg/L)构建MPC-5损伤模型,FK506组同时滴加PAN(浓度50 mg/L)和FK506(浓度5 mg/L)。分别于12、24、48 h在倒置显微镜下观察MPC-5的形态结构;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR法检测Park7 mRNA的表达;采用Western blot、免疫荧光染色法检测Park7蛋白表达。结果对照组各时间点细胞体足突数量多,细胞之间连接紧密,呈正常形态;PAN组各时间点细胞体积较对照组明显缩小,细胞间连接松散,可见破碎细胞;FK506组各时间点细胞体积较PAN组增大,细胞之间的连接较紧密,形态好转。PAN组各时间点细胞凋亡率较对照组明显升高,FK506组各时间点细胞凋亡率较PAN组均下降(P<0.05)。PAN组各时间点的Park7 mRNA表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7 mRNA表达量较PAN组均下降(P<0.05)。Western blot结果显示PAN组中各时间点Park7蛋白表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7蛋白表达量较PAN组均下降(P<0.05)。免疫荧光染色显示PAN组Park7蛋白分布在细胞膜和细胞质中,较对照组明显增加,呈密集团状分布,荧光强度增加;FK506组Park7蛋白分布较PAN组明显降低。结论PAN作用于MPC-5可引起细胞形态结构损伤及凋亡,以及Park7 mRNA及其蛋白的表达上调;FK506可使MPC-5损伤模型的Park7 mRNA及其蛋白表达下调,维持细胞功能稳态,减轻蛋白尿,延缓肾小球硬化。

以COL4A5基因突变为主Alport综合征临床分析

目的对COL4A5基因突变的X连锁遗传的Alport综合征(X-linked Alport syndrome,XLAS)患儿的临床表型及基因突变类型进行分析,探讨XLAS患儿与肾病综合征肾炎型的关系。方法纳入2016年4月至2023年4月期间在医院经二代测序发现COL4A5基因突变最终确诊为Alport综合征的32例患儿,回顾性分析其临床病理特征与基因突变特点。结果XLAS患儿平均起病年龄(3.68±2.07)岁,平均确诊年龄(6.56±2.95)岁,以孤立性血尿起病12例(37.5%),以血尿和蛋白尿起病8例(25%),以肾病综合征肾炎型起病12例(37.5%),患儿家族史阳性有11例(34.4%),眼部病变3例(9.37%),耳部病变6例(18.75%),后期随访发现7例(21.87%)患儿已发展为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)。21例患儿行肾脏组织穿刺活检,电镜表现为基底膜变薄(弥漫性或节段性)13例(61.9%),基底膜厚薄不均8例(38.09%);光镜:局灶节段肾小球硬化(FSGS)2例(9.52%),系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)11例(52.38%),微小病变(MCD)8例(38.09%)。基因突变类型分为错义突变12例(37.5%)、剪切位点突9例(28.12%)、无义突变6例(18.75%)、缺失突变3例(9.37%)、移码突变2例(6.25%)。遗传突变22例(68.75%);自发突变10例(27.02%)。结论XLAS患儿在疾病早期临床表现和病理特征均不典型,进展缓慢,部分患儿早期易误诊为肾病综合征肾炎型,对于疑似本病尽早完善基因检测,合理药物选择,科学预测预后。

CD2AP分子mRNA和蛋白的表达在肾组织及细胞损伤中的作用

目的观察CD2AP分子mRNA和蛋白的表达在嘌呤霉素(PAN)肾病模型及肾小球足细胞系损伤中的作用。方法将雄性SD大鼠64只随机分为肾病模型组和对照组,每组32只。肾病模型组大鼠尾静脉注射PAN 5 mg/kg,建立PAN肾病模型;对照组注射8 mg/kg生理盐水。分别于第2、4、6和8周每组各处死8只大鼠用于实验。体外培养小鼠肾小球足细胞系(MPC5),分为细胞刺激组和对照组,细胞刺激组给予PAN刺激足细胞,于刺激后12、24和48 h收集足细胞用于实验;对照组用RPMI 1640培养液培养足细胞。光镜下观察肾病模型组肾组织的病理学改变;倒置显微镜下观察细胞刺激组足细胞的形态变化;应用荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光染色检测肾病模型组、细胞刺激组和对照组不同时间点CD2AP分子mRNA、蛋白表达及分布的变化。结果(1)肾病模型组病理学变化为系膜和细胞外基质增生,部分或广泛肾小球呈局灶节段性硬化;肾病模型组注射PAN后第2周CD2AP分子mRNA和蛋白的表达量明显下降,一直持续至第8周。(2)细胞刺激组形态变化为刺激后12、24及48 h足细胞体积明显缩小,主要表现为足突回缩、消失及失去细胞间连接;细胞刺激组在给予PAN刺激后12 h CD2AP分子mRNA表达明显下降,mRNA表达下降持续至PAN刺激后48 h;CD2AP的蛋白表达在刺激足细胞12 h时无显著改变,在24和48 h时CD2AP的蛋白表达明显下降。(3)免疫荧光染色显示,正常情况下CD2AP均匀分布于足细胞的细胞核、细胞浆及细胞膜;细胞刺激组12和24 h CD2AP分布出现异常,在细胞核和细胞浆呈粗颗粒状分布,刺激48 h后在细胞膜和细胞浆出现分布缺失。结论 CD2AP在大鼠PAN肾病模型及体外培养肾小球足细胞系中mRNA和蛋白的表达明显下调,提示CD2AP分子是肾小球足细胞损伤的重要标志,CD2AP表达量及分布变化可能是临床上蛋白尿发生的分子机制。