生物芯片技术

随着人类基因组计划的不断进展，编码人类全部染色体的约10万条基因逐步地被发现，面对庞大的基因组及蛋白质组信息，应运而生了一系列用于基因功能研究和分析的新技术、新方法。其中生物芯片技术是当今世界最尖端的应用型科学之一，将从根本上改变生物学和生物技术的观念和效率。美国《财富》杂志曾载文指出，20世纪科技史上有两件事影响深远，一是微电子芯片，它是计算机和许多家用电器的心脏，改变了人类的经济和文化生活；二是生物芯片，它将改变生命科学的研究方式，革新医学诊断和治疗，极大地提……

心血管疾病治疗中需注意的问题

联合用药需注意的问题 在某些心血管疾病的治疗中，不同机制的药物联合应用既能起协同作用，又可减少用量，且可降低甚或可相互抵消某些不良反应，如抗高血压药中肾上腺素β受体阻滞药加二氮吡啶类钙拮抗剂，血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）加钙拮抗药等的联合用药。但临床不合理的联合用药可造成相反结果。应该引起临床医师的重视。

谈谈心肌梗死的诊断

随着我国社会的不断进步,人民生活水平不断提高和人们面临的竞争压力不断增加,我国冠心病的发病率和病死率居高不下。现已成为常见病和多发病之一。对冠心病特别是心肌梗死的早诊、早治就显得十分重要。 近10年来,医学基础和临床研究已得到长足发展,已能从基因和分子水平研究疾病的发生和发展。高新技术不断引入,现代CT、磁共振、微电子技术、超声、核医学已在医学领域得到广泛应用,介入性诊疗技术的兴起,已使人们对疾病的认识不断深化,诊断治疗水平有了很大提高。尽管如此。

心血管病临床诊断问与答(三)

1.应用听诊器膜型胸件应注意哪些原理,以便指导临床实践？ 答：①光滑、硬挺而薄的隔膜可以阻抑低频率声音,显出高频率声音。若隔膜的谐振频率与杂音相同,则它将放大杂音。如果隔膜太厚,振幅的减损会过大。②低频率声音容易遮盖高频率声音，除非低频率声音与高频率声音的音调相差很大，或者低频率声音比较柔和。③高频率声音不容易遮盖低频率声音，除非高频率声音太响。

心血管病临床诊断问与答(二)

1．为什么听诊器管子的厚度会影响听诊？为什么橡皮管不适于用作听诊器的管子？答：管子越厚。越能去除室内其他噪声。就隔音而言，乙烯基塑料管比橡皮管好。橡皮管内面比较粗钝，内摩擦力高，会阻抑声音在管内的传导，所以橡皮管不适于用作听诊器的管子。

介入治疗后冠状动脉再狭窄与冠心病易患因素吸烟关系分析

目的 探讨国人冠心病介入治疗后再狭窄与冠心病易患因素吸烟关系。方法 冠心病介入治疗35 2例中 ,选择连续 6 5例 (86个冠脉狭窄病变 )术后 3～ 16个月随访重复冠脉造影者 ,冠脉定量分析 (QCA)术前、术后和随访复查冠脉造影图象 ,并分析再狭窄发生率及随访时内径丢失与冠心病易患因素的关系。结果 再狭窄发生时间与吸烟史、多个易患因素、多支病变、病变类型、前降支病变、随访期尿酸呈正性相关 ,与支架置入呈负性相关。吸烟者 (37个病变 ) 16个月再狭窄累计发生率 (88.33 % )高于非吸烟者 (4 9个病变 ,6 6 .49% ,P<0 .0 5 ,Kaplan Meier法和log rank检验 ) ,再狭窄者吸烟量大 ;吸烟史者随访最小内径较小 ,但晚期内径丢失大于非吸烟者。结论 冠心病易患因素与介入后再狭窄发生可能有密切关系 ,多个易患因素特别是吸烟史 。

人纤溶酶原Kringle5区的基因克隆的表达及纯化

目的克隆人纤溶酶原Kringle5 (K5 )区基因 ,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定。方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因 ,构建K5的原核表达载体pET 2 2b(+) K5 6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+ -树脂亲和层析进行纯化 ,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性。结果经PCR成功扩增出了 2 4 3bp的K5区基因 ,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET 2 2b(+) ,重组质粒在BL2 1中成功表达出分子量为 14 0 0 0的蛋白质 ,纯化后的蛋白纯度达95 % ,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能 ,K5蛋白浓度为 4 μg/mL时抑制率达 5 0 %。 结论纤溶酶原K5的成功克隆。

900MHz拟手机电磁辐射对大鼠卵巢组织形态和功能的影响

目的观察900 MHz拟手机电磁辐射对大鼠卵巢组织形态和功能的影响。方法 20只SD雌性大鼠随机分正常组和辐射组,每组10只。正常组置辐射箱中不接受辐射,辐射组每天暴露于900 MHz手机辐射源4 h连续30 d,阴道涂片显示动情期处死大鼠。采用放射免疫法检测大鼠血清睾酮(T)、雌二醇(E2)含量,HE染色观察卵巢组织形态变化。结果辐射组大鼠血清E2水平较正常组显著降低(P<0.05),而血清T含量无显著差异(P>0.05)。与正常组相比,辐射组大鼠卵泡和黄体直径均小于正常组,颗粒细胞层数和数量减少。结论 900 MHz拟手机电磁辐射可影响大鼠卵巢形态和功能,损伤雌性大鼠生殖功能。

血管紧张素原基因T174M和M235T多态与原发性高血压的关系

目的 研究血管紧张素原 (AGT)基因第 2号外显子T174M和M 2 35T多态与中国汉人原发性高血压 (EH)的关系。方法 采用多重SNaPshot反应 ,在 185例EH患者 (EH组 )和 185名健康对照者 (对照组 )中 ,对T174M和M 2 35T多态进行基因分型。结果 对照组与EH组T174M和M2 35T多态的CC、CT和TT基因型分布的差异无显著性 (P值均 >0 .0 5 ) ;C、T等位基因频率的差异亦无显著性 (P值均 >0 .0 5 )。按性别进行分层 ,EH组女性的M 2 35T多态的基因型分布 (5 3、2 8、2 )与对照组女性 (37、11、6 )的差异有显著性 (χ2 =6 .4 0 3,P =0 .0 4 1)。Logistic回归分析显示 ,年龄 (β =0 .36 6 ,OR =1.4 4 2 ,95 %CI =0 .988～ 2 .10 4 ,P =0 .0 5 8)、体重指数(β =0 .2 11,OR =1.2 34,95 %CI=1.0 78～ 1.4 14 ,P =0 .0 0 2 )、三酰甘油 (β =1.70 5 ,OR =5 .5 0 1,95 %CI =2 .179～ 13.890 ,P =0 .0 0 0 )和血糖 (β =0 .74 5 ,OR =2 .10 6 ,95 %CI =1.0 4 0～ 4 .2 6 4 ,P =0 .0 39)均是EH发生的独立危险因素。结论 AGT基因M 2

雷公藤内酯醇对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,细胞融合达60%时培养基中加入不同浓度的雷公藤内酯醇和雷帕霉素。采用细胞计数法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期;RTPCR法检测VSMCs内cfosmRNA表达水平。结果雷公藤内酯醇和雷帕霉素均明显抑制血清诱导的大鼠VSMCs增殖,阻断细胞由G0/G1期向S期转化;RTPCR检测显示,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,cfosmRNA表达明显减少。结论雷公藤内酯醇能明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,而阻断细胞周期、下调原癌基因cfosmRNA的表达可能是其药理机制之一。

经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄与介入前病变形态学的关系

目的：探讨国人冠心病经皮冠状动脉腔内成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄与冠状动脉（冠脉）病变类型、部位和病变血管数的关系。 方法：冠心病介入治疗３５２ 例，选择其中６５ 例（８６个病变）术后３～１６个月造影随访者，按随访结果分为再狭窄组（ｎ＝ ３８），非再狭窄组（ｎ＝ ２７），分析再狭窄与病变形态学的关系。 结果：再狭窄与多个易患因子、多支病变、病变类型和前降支病变呈正相关，与支架置入呈负相关。再狭窄组Ｃ型、钙化病变多见，前降支病变内径丢失比回旋支、右冠脉病变大（Ｐ＜ ０．０５），半年内一支血管病变再狭窄率（１０．２７％ ）低于二支（４１．１０％ ）和三支（４８．５０％ ）血管病变再狭窄率（Ｐ＜ ０．０００１）。 结论：再狭窄与冠脉病变类型、部位和血管支数相关，Ｃ型及钙化。

血管紧张素原基因T174M和M235T多态与脑梗塞的关系

目的 研究血管紧张素原(AGT)基因第2号外显子T174M和M235T多态与中国汉人脑梗塞发病的关系。方法 采用多重SNaPshot反应,在90例脑梗塞患者和90名健康对照者中,对T174M和M235T多态进行基因分型。结果 T174M多态基因型在脑梗塞组和对照组之间有差异,但未达到统计学意义(P=0.071);T、C等位基因频率与对照组相比有显著性差异(P=0.045)。M235T多态基因型在脑梗塞组和对照组中无显著性差异(P=0.194);脑梗塞组的C等位基因频率高于对照组,但未达到统计学意义(P=O.057)。在男性脑梗塞患者中,M235T多态基因型和等位基因频率与对照组相比均有显著性差异(P=0.030,P=0.011)。结论 AGT基因T174M多态可能与汉族整体人群脑梗塞的发病相关,而M235T多态可能只与男性脑梗塞的发病相关。

地尔硫对肥厚性心肌病病人左室舒张功能和室间隔厚度的影响

目的：探索地尔硫对肥厚性心肌病（ＨＣＭ）病人左心室舒张功能与室间隔厚度（ＩＶＳＴ）的影响。方法：３２例ＨＣＭ病人（男性２１例，女性１１例；年龄４８ａ±ｓ１０ａ）给地尔硫片３０～６０ｍｇ，ｐｏ，ｔｉｄ×５ａ，给药前、给药后０．５ａ与５ａ进行超声心动图检查。结果：地尔硫治疗０．５ａ左心室舒张功能包括等容舒张时间、Ｅ峰减速度与舒张早期加速度面积（ＥＡＡ）已有显著改善（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）；治疗５ａ上述效应进一步增加；同时ＩＶＳＴ及左心房内径有轻度减退趋势（Ｐ＞０．０５）。结论：长期服用地尔硫能持续改善ＨＣＭ病人的左室舒张功能、抑制室间隔的进一步增厚。

冠心病介入治疗后再狭窄因素分析

目的探讨冠心病介入治疗后再狭窄与冠心病易患因素关系。 方法冠心病介入治疗 44 0例中 ,选择连续 84例 (115个狭窄病变 )术后随访冠脉造影复查者 ,冠脉定量分析 (QCA)术前、术后和随访复查冠脉造影图象 ,并分析再狭窄与冠心病易患因素的关系。 结果患者 6个月再狭窄率为 40 .0 0 % ,多元回归分析再狭窄发生时间与吸烟史、多个易患因素、多支病变、病变类型和前降支病变呈正性相关 ,与支架置入呈负性相关。 结论冠心病易患因素与介入后再狭窄发生有密切的关系 ,特别是吸烟史。

重组杆状病毒载体在哺乳动物细胞中的表达

目的 探讨重组杆状病毒作为哺乳动物基因转导载体的可行性及其转导特点。方法 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,以不同MOI的病毒和不同终浓度丁酸钠感染各哺乳动物细胞系。通过荧光倒置相差显微镜和流式细胞仪观察检测细胞转导率和绿色荧光蛋白(GFP)表达强度。结果 发现HEK293细胞中,Bac-GFP转导率和GFP表达强度随着MOI和丁酸钠浓度的提高而显著增高(P<0.01),报告基因GFP的表达第2d最高,至少可持续9d。Bac-GFP可感染不同种属不同组织的哺乳动物细胞系,但转导率有差异。结论 重组杆状病毒可以用于体外基因转导。

血管紧张素原基因启动子区域单核苷酸多态性与心肌梗死的相关性

为研究血管紧张素原基因启动子区域 - 2 17、- 2 0位和 - 6位上的三种单核苷酸多态性与心肌梗死的相关性 ,采用多重SnaPshot反应 ,在中国南方汉人群中 ,对 2 16例心肌梗死患者和 185名健康对照者进行G 2 17A ,A 2 0C和G 6A多态基因分型。结果发现 ,G 2 17A多态AA、AG和GG基因型分布和A、G等位基因频率在心肌梗死组与对照组之间相比有显著性差异 (分别为 10、77、12 9比 8、37、14 0 ,P =0 .0 0 2 ;2 2 .4 5 %、77.5 5 %比 14 .32 %、85 .6 8% ,P=0 .0 0 3)。G 6A多态AA、AG和GG基因型分布在心肌梗死组和对照组之间亦有显著性差异 (分别为 14 7、6 4、5比12 7、4 4、14 ,P =0 .0 2 9) ,但A、G等位基因频率在两组间无显著性差异 (P =0 .394 )。A 2 0C多态CC、AC和AA基因型分布在两组间有差异 (分别为 6、5 1、15 9比 2、6 1、12 2 ) ,但无统计学意义 (P =0 .0 6 7) ,C、A等位基因频率在两组间亦无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Logistic回归分析发现 ,年龄 (P =0 .0 0 1)、收缩压 (P =0 .0 13)和血浆甘油三酯浓度 (P =0 .0 10 )是该人群发生心肌梗死的独立危险因素 ,而高密度脂蛋白胆固醇 (P =0 .0 18)是一种保护因素。结果提示 ,在中国南方汉人群中 ,血管紧张素原基因G 2 17A和G 6A多态可能与心肌梗死的发生?