反向斑点杂交法快速检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯G病毒

【目的】以克隆得到的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯G病毒(Sweet potato virus G,SPVG)基因片段为探针建立反向斑点杂交技术体系,应用于甘薯组培脱毒苗带毒情况检测,为生产优质甘薯组培脱毒苗提供保障。【方法】根据已公布的侵染甘薯的SPFMV和SPVG的核苷酸序列设计两对特异引物,以RT-PCR法从染病的甘薯叶片扩增SPFMV和SPVG的两个片段,并以克隆到的两个病毒片段及内参基因Actin片段为探针建立反向斑点杂交体系。【结果】分别克隆出长度约310和500 bp的片段,经BLAST比对,所获得的310 bp片段为SPFMV的外壳蛋白基因片段,同源性为97%,500 bp片段为SPVG的外壳蛋白基因片段,同源性为99%。分别用带有SPFMV和SPVG片段的重组质粒pUC-SPFMV和pUC-SPVG进行反向斑点杂交,发现不同病毒能获得单一信号,无交叉现象。以染病甘薯和脱毒甘薯苗为样品,用该种病毒的探针进行反向斑点杂交,染病植株样品中能获得单一信号,而脱毒苗甘薯样品未见任何信号,杂交结果与RT-PCR检测结果一致。【结论】用建立的反向斑点杂交技术体系能有效检测甘薯中的SPFMV和SPVG,无交叉信号,可用于甘薯组培脱毒苗的前期检测。

基于香蕉叶片解剖结构的抗寒性评价

利用石蜡切片技术对不同抗寒性的香蕉叶片解剖结构进行研究,为香蕉的抗寒育种提供参考。结果表明,香蕉叶片属典型的异面叶,具有复表皮结构。海绵组织厚度在不同香蕉种质间的变化最大,其次为栅海比。通过聚类分析和相关性分析筛选出海绵组织厚度和栅海比作为香蕉种质抗寒性评价的解剖结构指标。通过隶属函数对18个香蕉种质进行了综合评价,其抗寒性大小顺序为:LT>粉杂>金粉1号>广东粉蕉>HA>LE>LNF>SNY>SNT>NLF>HR>桂蕉青7号>HLT>LNS>SDW>桂蕉6号>ZNF>HLE。通过聚类分析,可以将这些种质分为3类,其中LT、粉杂和金粉1号在供试种质中抗寒性最强。

18个香蕉种质幼苗的抗寒性鉴定

通过低温处理后的生理及形态指标变化对18个香蕉种质幼苗的抗寒性进行了鉴定。结果表明,单项生理指标所提供的抗寒相关信息有较多重叠,不能直接利用它们对香蕉的抗寒性进行准确的评价。通过主成分分析,可以将8个单项指标转化为3个综合指标对18个香蕉种质幼苗的抗寒性进行综合评价,其抗寒顺序依次为:LT>粉杂>金粉1号>广东粉蕉>SNT>LNS>桂蕉青7号>HLT>LE>SNY>LNF>HA>NLF>HR>桂蕉6号>SDW>ZNF>HLE。依据综合得分进行系统聚类分析,可以将18个香蕉种质聚为3类,第Ⅰ类包括LT、粉杂和金粉1号3个种质,其抗寒能力最强;第Ⅲ类包括HLE、SDW、桂蕉6号和ZNF 4个种质,其抗寒能力最弱;其余的11个种质聚为第Ⅱ类,抗寒能力居中。通过形态鉴定的结果与通过生理指标综合评价的结果基本一致。

中早熟马铃薯品种(系)遗传多样性ISSR分析

【目的】采用ISSR分子标记研究中早熟马铃薯品种（系）的亲缘关系及遗传多样性，为南方冬作区中早熟马铃薯育种亲本选择提供参考。【方法】利用筛选的8条ISSR引物，对33份广西各地应用的马铃薯品种（系）进行遗传多样性分析。【结果】8条引物共扩增出46条条带，其中有29条呈多态性，平均多态性带比率为63.0%。33份马铃薯品种（系）的遗传相似系数在0.63045-1.00000，平均相似系数为0.80967。聚类分析结果表明，在相似系数0.79000附近，33份马铃薯品种（系）可分为四大类，第一大类有4个品种（系），分别是DE03-34-6、JL03-786、中薯19号和中薯18号；第二大类仅有中薯6号；第三大类包括龙脊1号和DE03-79-1两个品种（系）；余下的26份品种（系）聚为第四大类。在分类中，部分亲缘关系较近的品种如中薯13号和中薯14号、中薯18号和中薯19号可聚为较近的一类，说明ISSR分子标记能够正确地按马铃薯的亲缘关系进行分类。【结论】供试马铃薯品种（系）间存在较丰富的遗传多样性，可根据聚类分析结果中的遗传距离选择亲本，为南方冬作区中早熟马铃薯育种亲本的选择和杂种优势利用提供参考。

基于主成分分析的5份香蕉种质抗旱性评价

通过向营养液中添加PEG-6000,研究在不同程度干旱胁迫下5份香蕉种质的生理变化,并利用这些生理指标进行抗旱性综合评价。结果表明,香蕉在干旱胁迫下,可溶性蛋白含量、脯氨酸含量、电导率、丙二醛含量、POD活性和SOD活性6项生理指标均发生不同程度的变化,随着干旱胁迫程度的加重,这些指标均有上升的趋势。通过主成分分析,可以将6个单项指标转化为3个综合指标对5份香蕉种质的抗旱性进行综合评价,其抗旱能力大小顺序依次为:金粉1号>广东粉蕉>粉杂>HA>桂蕉6号。本实验筛选出金粉1号和广东粉蕉2个较为抗旱的ABB基因型种质,评价结果将为今后广西的香蕉抗旱育种以及确定香蕉品种的适合种植范围提供理论依据。

飞机草类黄酮3’-羟化酶基因(CoF3’H)的克隆及其在烟草中的表达

利用RT-PCR和RACE技术从飞机草中克隆得到1628 bp的类黄酮3’-羟化酶c DNA的全长序列,命名为Co F3’H,Gen Bank登录号为HQ268505.1。Co F3’H基因的编码区长度为1524 bp,编码507个氨基酸。氨基酸序列含P450蛋白结构域和半胱氨酸亚铁血红素结合域保守区(F××G×R×C×G),利用DNAMAN软件比对显示,Co F3’H与其他植物的F3’H蛋白的同源性很高。通过农杆菌介导成功地将Co F3’H基因导入烟草,T2代的转Co F3’H基因烟草植株的黄酮含量显著高于野生型。说明Co F3’H在黄酮的生物合成中起重要作用,为后续研究飞机草的化感作用及综合利用提供基础。

木薯新品种新选048离体微扦插快速繁殖技术

以木薯新品种新选048腋芽为外植体,对木薯离体微扦插途径进行研究。结果表明,采用0.1%HgCl2溶液灭菌木薯外植体6～12 min,对外植体的存活率影响不明显,外植体成活率为32.3%～37.9%。将在MS+NAA 0.1 mg/L中诱导培养获得的腋芽剪成带芽茎段,扦插到含0～0.3 mg/L NAA、0～1.5 mg/L 6-BA的MS培养基中,其在MS+0.3 mg/L NAA培养基中的增殖和生长效果最好,增殖系数高、苗壮且整齐、根白色粗壮,愈伤组织白色、生长正常。与河沙相比,以木糠为木薯组培苗的假植基质较好,成活率达70%以上。

飞机草不定根形成过程中的结构和生理变化

【目的】研究飞机草不定根形成过程中的解剖结构和生理变化,了解其不定根形成特性,为进一步阐明飞机草无性繁殖机制奠定基础。【方法】通过扦插试验,研究飞机草在不同基质、不同含水量中的生根情况,并在生根过程中进行解剖结构观察,同时测定相关内源激素含量、POD活性及黄酮含量。【结果】飞机草在菜园土、红土、河沙3种基质中生根率均为100.0%。极度干旱（水分含量0）或水分过多时（80%）不能生根,在基质含水量为20%-60%时均能迅速长出不定根。解剖结构发现,飞机草茎段皮层中没有环状厚壁细胞,皮层薄且髓部较大,不定根原基产生于束中形成层,生根过程中没有愈伤组织产生,根原基形成和不定根突破表皮的时间分别为扦插后3和7 d。在飞机草不定根形成过程中,相关生理指标均发生显著变化;IAA含量总体呈上升—下降—上升的变化趋势,ABA及黄酮作为生根抑制物,其含量在生根过程中总体呈下降趋势;ZT含量峰值出现在扦插后3 d;POD活性最低值出现在扦插后1 d,最高值出现在扦插后3 d,且生根过程中的活性比未扦插时极显著升高。【结论】飞机草不定根形成具有极强的环境适应性,其解剖结构和扦插过程中内源激素含量的变化均符合易生根植物特征。

玻璃粉吸附核酸及其在植物核酸提取中应用的研究

为研究玻璃粉在植物核酸提取中的应用,比较了玻璃粉颗粒大小、离液盐种类及浓度、pH等条件对玻璃粉吸附核酸的影响,得出玻璃粉吸附核酸的各种最佳条件。结果表明,普通玻璃粉吸附核酸能力强于硅胶和硅藻土,玻璃粉颗粒的直径以83μm为佳,pH4.0时吸附效果达到最大。提取DNA时,NaCl浓度应大于3mol/L,而提取RNA时,异硫氰酸胍大于2mol/L就能取得很好的效果,此外,在玻璃粉吸附RNA前,需要加入50%以上的无水乙醇才能更好地吸附。利用玻璃粉制作简易纯化柱,可用于植物组织核酸提取纯化,所提取的核酸纯度高、完整性好,可用于酶切、杂交和PCR等实验。与传统方法相比,采用玻璃粉简易离心柱提取植物核酸,效果好、环保、快速、经济。

早熟马铃薯ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

为得出马铃薯ISSR-PCR最佳的反应体系,采用正交试验设计,对r Taq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、d NTPs和引物进行5因素4水平筛选。结果表明,马铃薯ISSR-PCR的最佳反应体系为:总体积25μL的反应体系中含有r Taq DNA聚合酶0.5 U、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、模板DNA用量为75 ng、d NTPs浓度为200μmol/L、引物浓度为0.8μmol/L。这些因素对PCR反应的影响大小顺序为Mg2+浓度>r Taq DNA聚合酶用量>d NTPs浓度=引物浓度>模板DNA用量。应用该最佳反应体系对39条ISSR引物进行筛选,得出15条条带清晰、条带数多、重复性好的引物。并通过退火温度梯度试验得出筛选引物的最佳退火温度。

广西桂北喀斯特地区野生毛葡萄种质资源初步评价

为评价筛选出优良的野生毛葡萄种质资源,以38份广西桂北地区野生毛葡萄种质资源作为材料,调查、分析其叶片、枝条、果穗及浆果等生物学性状及农艺性状,并根据各性状对这些种质资源进行分类。结果表明:广西桂北地区野生毛葡萄的种质资源之间的生物学性状及农艺性状存在着广泛差异,其遗传多样性丰富。通过对各性状进行比较,从中筛选得到4份具有穗大、可溶性固形物含量高等优良性状的资源,将为高产优质的毛葡萄新品种选育提供基础。

甘蔗品种“粤糖55号”的离体快速繁殖

以甘蔗品种＂粤糖55号＂为材料,对其离体快繁技术进行了研究。结果表明,用带腋芽的甘蔗茎段作为外植体,经0.1%HgCl2消毒7min后,接种到MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的培养基上进行启动培养,能够诱导丛生芽。丛生芽继代和生根最优的培养基分别为MS＋6-BA 1.0 mg/L和MS＋NAA 2.0mg/L。甘蔗组培苗生根炼苗后,移到木糠中进行假植,成活率为90%~95%。

多效唑对粉蕉农艺性状、产量及品质的影响

为探讨PP333对粉蕉产量及品质的影响,在金粉1号粉蕉品种苗期淋施PP333,以淋施清水为对照（CK）,于收获期测量粉蕉茎、叶、果等部位的性状指标,采用分光光度计及滴定法测定果实品质。结果表明,在金粉1号叶鞘处和植株周围淋施PP333（T1和T2处理）,其植株高度分别为3.70m和3.32m,极显著低于CK（P〈0.01）,叶片厚度增加0.13~0.16 mm,极显著厚于CK;T2处理的叶间距比CK减少4.38 cm,且差异极显著;果穗长和周长、果指外弧及内弧长、产量和品质等指标与CK差异不显著（P〉0.05）。试验结果为粉蕉的矮化栽培提供参考依据。

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。

不同栽插密度及施肥量对京薯6号产量的影响

【目的】探讨不同栽插密度及施肥量对京薯6号产量的影响,为该品种在广西的高产栽培提供依据。【方法】采用栽插密度与施肥量的L9(34)正交设计,4个试验因素分别为栽插密度(A)、施氮量(B)、施磷量(C)和施钾量(D),各因素均对应3个试验水平。测定小区鲜薯产量,对结果进行极差和方差分析,对比不同因素对产量的影响。【结果】在试验设计条件下,栽插密度因素对京薯6号产量影响最大,其次为施钾量和施氮量,施磷量的影响相对较小;其中,栽插密度和施钾量对京薯6号产量的影响达极显著水平(P<0.01),施氮量达显著水平(P<0.05)。【结论】在广西南宁地区种植京薯6号的适宜密度为6.00万株/ha,氮、磷、钾肥料的适宜用量分别为纯N 135 kg/ha、P2O545.0 kg/ha、K2O270 kg/ha。

毛葡萄产业化组培育苗技术研究

毛葡萄组织培养,通常存在玻璃化和成本高、成活率低等问题,不利于产业化生产,从技术路线入手,探索毛葡萄产业化育苗新工艺,经多年研究及生产应用表明:在1/2MS+BA0 01～0 05+IAA1 0～2 0培养基上,培养光照强度1500～2000lux,温度27～30℃,采用组培微型扦插方式,可以实现毛葡萄组培育苗产业化。以塘泥:椰糠或河沙=2∶1为基质,假植成活率可达90%以上。

基于GC-MS的不同香蕉品种果实香气品质分析

【目的】分析不同品种香蕉果实香气品质特征,为开展香蕉果实品质评价及新品种选育提供参考依据。【方法】采用顶空固相微萃取结合气相色谱—质谱联用(GC-MS)技术对2个基因组类型蕉类(ABB基因型粉蕉和AAA基因型普通香蕉)7个品种(ABB基因型的金粉1号、30b、32b、35b和55b及AAA基因型的桂蕉6号和宝岛蕉)相同成熟阶段果实的香气组分进行分离,测定分析其品质特征差异。【结果】从7个品种香蕉果实中共检测到48种挥发性香气物质,其中酯类物质24种,羰基化合物9种,以及醇类、酸类、酚类和其他类化合物等;酯类物质的相对含量占香气物质总含量的33.51%~72.66%,是构成香蕉果实香气物质的主要成分,其关键组分是乙酸异戊酯、异丁酸异戊酯、丁酸丁酯和己酸乙酯等黄熟香蕉的特征香气物质;普通香蕉品种的挥发性香气物质种类及其含量均多于或高于粉蕉品种,其中宝岛蕉的香气物质种类最多,相对含量最高,分别为41种和80.70%;粉蕉品种中55b的香气物质种类最多,为34种,金粉1号的香气物质相对含量最高,为66.20%。【结论】相同成熟阶段不同品种香蕉果实的香气物质主要为乙酸异戊酯、异丁酸异戊酯、丁酸丁酯和己酸乙酯等酯类物质,但普通香蕉品种成熟果实香气物质成分的种类和含量均多于或高于粉蕉品种,而粉蕉品种中以55b的香气物质种类最丰富,金粉1号的香气物质相对含量最高。

广西特色蕉类种质资源遗传多样性ISSR分析

利用ISSR分子标记技术对广西特色蕉娄种质资源的遗传多样性进行分析。结果表明，从合成的35条ISSR引物中，筛选出13条条带清晰、多态性丰富及重复性好的引物，共扩增出96条条带，其中91条为多态性条带，平均多态性百分率达到93．69％。65份特色蕉类种质资源的遗传相似系数在0．479167～1000000之间，平均为0．804726。聚类分析结果表明，在遗传相似系数为0．71时，可以将基因型为ABB的大蕉及粉蕉与其他基因型的蕉类种质资源进行区分；遗传相似系数在0．74时，能够把大蕉和粉蕉区分开来。而在相似系数为0．76附近，大蕉种质资源聚成3类，在0．92附近时，粉蕉种质资源可聚为4类。

两性花毛葡萄野酿2号芽变株系Y137的鉴定及评价

【目的】鉴定评价毛葡萄品种野酿2号的芽变株系Y137,为两性花毛葡萄优良新品种(系)提供亲本材料。【方法】对野酿2号芽变株系Y137进行形态学特征、生物学特性、果实品质特性等方面的观察及测定,以野酿2号为对照进行对比分析;并利用ISSR分子标记对芽变株系Y137进行遗传变异分析。【结果】芽变株系Y137在形态学特征、生物学特性、果实品质特性等方面与野酿2号存在明显差异:芽变株系Y137幼果为圆形,野酿2号幼果为椭圆形;芽变株系Y137成熟期比野酿2号提早7～10 d;芽变株系Y137可溶性总糖含量和糖酸比分别比野酿2号提高66.40%和90.64%,可溶性固形物含量比野酿2号提高15.5%。筛选出的9条引物共扩增出57条条带,多态性条带为7条,多态性比例为12.28%,遗传相似系数为0.8772,说明芽变株系Y137与野酿2号的基因组DNA存在差异,但遗传背景相似度较高。【结论】芽变株系Y137部分果实品质指标优于野酿2号,初步判定其为野酿2号的优良芽变,可作为毛葡萄新品种选育及品种改良的亲本材料。

水稻化感品种生理生化特性研究

以莴苣为受体,于3叶期、6叶期、8叶期和成熟期对15个水稻化感品种的化感作用进行分析,结果表明,6叶期水稻化感品种对莴苣根长和苗高的抑制效果最明显,化感作用表现最强;在6叶期,对具强化感作用水稻品种HG1和HG2不同部位取样测定,表明不同部位对莴苣根长和苗高的抑制效果不同,依次是:叶>茎>根。6叶期,对不同化感品种苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性以及受体稗草超氧化物歧化酶(SOD)活性进行测定,表现为:水稻化感品种PAL活性与其抑制杂草效果密切相关;水稻化感物质可降低受体稗草体内SOD活性,水稻化感抑制作用越强,其受体稗草体内SOD活性越低。