人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;

抗癌化疗的一些基本原则

用化学药物治疗恶性肿瘤是本世纪四十年代开始的,以后发展迅速,但以寻找新药为主,临床药理学的研究,近20年来才被重视,后者侧重于药物、肿瘤和宿主三者相互作用的规律和机理;包括药代动力学,药效动力学,药物间相互作用,药物的生物利用度,肿瘤生物学和细胞增殖动力学等。因此,只有对抗癌化疗的临床药理学有了全面的认识后,才能制订合理的给药方案,和对新药作出正确的科学的评价。

肿瘤生物治疗（第一讲）

肿瘤生物治疗（第一讲）何荣根Ⅰ概论１概况肿瘤生物治疗主要是通过调动宿主自身的各种防卫机制或者给予各种生物反应调节物产生抗癌作用的抗癌疗法。现已公认为继手术、放疗、化疗以后的第四种模式的抗癌方法。人们公认把ＩＬ－２作为第一个生物反应调节剂，因为它不同于...

肿瘤生物治疗(第二讲) Ⅲ、过继免疫疗法

肿瘤生物治疗（第二讲）Ⅲ、过继免疫疗法ＴＵＭＯＲＢＩＯＴＨＥＲＡＰＹ－ＡＤＯＰＴＩＶＥＩＭＭＵＮＯＴＨＥＲＡＰＹ何荣根１概述过继免疫疗法（Ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ＡＩＴ）是通过给荷瘤机体输注抗肿瘤免疫效应细胞或因子治疗肿瘤的一种疗...

Tca8113细胞系耐药性的实验研究

目的 建立耐顺铂 (CDDP)人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP ,对其耐药特性进行研究。方法 应用间歇性加药 ,逐步递增剂量 ,体外连续诱导培养方法 ,获得Tca8113耐药细胞。采用MTT法 ,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞倍增时间、裸鼠成瘤性、化疗药物敏感性、P gp和GST π蛋白表达进行研究。结果 初步建成耐CDDP的人舌鳞癌细胞系 (Tca8113/CDDP) ,其耐CDDP浓度为 10 μmol/L。该细胞同时对卫猛 (Vm 2 6 )、博来霉素 (BLM)、长春地辛 (VDS)、表阿霉素 (E ADM)、泰素 (Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代 1月后 ,倍增时间从 2 9.9h降至16 .7h ,具有裸鼠成瘤性 ,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后 ,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带 ,耐药细胞Tca8113/CDDP则无。P gp(P 糖蛋白 )及GST π表达量升高 ,表明MDR 1mRNA表达水平增高。结论 CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113/CDDP细胞系具有多药耐药特性 ,GSH/GST解毒系统可能参与Tca8113/CDDP耐药性的产生。

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。

人涎腺腺样囊性癌肺转移裸鼠模型的建立

应用经体内外筛选和克隆化的肺高转移性涎腺腺样囊性癌Ａｃｃ－Ｍ细胞株建立肺转移裸小鼠模型。选用３月周龄雌性ＢＡＬＢ／Ｃｎｕ／ｎｕ裸小鼠６０只，经尾静脉接种１×１０６／０．２ｍｌ单细胞悬液。接种后１～３周内，组织学观察可见血管内有癌栓形成；接种后３～４周内为微转移灶期；接种后４～８周为巨视期，肉眼下可见转移灶；接种后８周动物死于肺转移。转移灶体内生长曲线表明，转移灶在４～５周时生长最快；转移灶潜伏期及带瘤生存期均较长，该模型是研究涎腺腺样囊性癌肺转移的良好模型。

放射联合高功率密度毫米波对人舌鳞癌细胞的协同抗瘤效应

目的 研究放射联合高功率密度毫米波对肿瘤细胞的协同抗瘤效应。方法 用γ－射线、高功率密度毫米波单独或联合照射人舌鳞癌Ｔｅａ ８１１３细胞，观察肿瘤细胞克隆形成抑制率，并行透射电镜和扫描电镜观察其超微结构改变。结果 放射联合高功率密度组（Ｒ＋ＨＬ）抑瘤率８２．０％，明显高于单放射组（Ｒ）的４６．７％和单毫米波组（ＨＬ）的４５．２％。毫米波功率密度、照射时间、有无联合放射对抑瘤率有非常显著的影响（Ｐ＜０．０１），放射与毫米波照射次序对抑瘤率无显著影响（Ｐ＞Ｍ０．０５）。电镜观察发现照射后细胞表面绒毛粘连、融合、脱落、细胞膜微孔、线粒体变性、胞浆内大量空泡等改变。结论 放射联合高功率密度毫米波对人舌鳞癌细胞有明显的协同抗瘤效应，放射与毫米波照射次序对抑瘤率无明显影响。

RARβ基因联合维甲酸体内抗口腔鳞癌作用机制研究

目的:探讨维甲酸受体β(nuclearretinoicacidreceptorbeta,RARβ)基因联合全反式维甲酸(alltransretinoicacid,ATRA)对荷口腔鳞癌裸鼠体内抗癌作用的机制。方法:ATRA、RARβ+ATRA和生理盐水分别治疗舌鳞癌移植瘤裸鼠4周,第四周末处死所有20只动物,取部分肿瘤组织固定后行常规病理切片,HE染色后光镜下观察并照相。切取部分肿瘤组织固定后行超薄切片和染色,透射电镜观察并照相记录。取部分新鲜组织,应用机械法制备单细胞悬液,PI染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,Lysis软件分析凋亡细胞比例。结果:肿瘤组织剖面呈鱼肉状、质脆,中央有坏死;光镜下见空白对照组肿瘤细胞增殖旺盛,细胞呈不均一圆形,核浆比例大,核染色深,核分裂相较多;ATRA和RARβ+ATRA治疗组细胞核分裂少见;ATRA处理组可见部分细胞核固缩;RARβ+ATRA治疗组有较多细胞出现核固缩,呈片状分布,偶见细胞片状坏死。空白对照组肿瘤细胞平均凋亡率为6.3%,ATRA组和RARβ+ATRA组凋亡率分别为16.4%和16.6%。两者与对照组相比凋亡率明显增高(P<0.05),但两处理组差别不明显。透射电镜下空白对照组肿瘤细胞呈多角形,核大,核仁多,分裂相较多,凋亡细胞极少。ATRA组可见散在的凋亡细胞,表现为细胞皱缩,变小、变圆,染色质固缩、边聚,细胞浆浓缩。

HSV-tk/GCV系统对ACC-M细胞作用的体外试验

目的：为研究ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统对涎腺腺样囊性癌细胞株（ＡＣＣ－Ｍ）细胞的体外杀伤作用。方法：采用ＭＴＴ法和细胞计数法对ＧＣＶ在不同剂量和不同作用时间时细胞的生存率进行研究。结果：ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统能有效地杀伤ＡＣＣ－Ｍ细胞，杀伤呈时间依赖性和剂量依赖性，这种作用有比较明显的旁杀伤效应，旁杀伤效应的强弱与细胞间的接触程度呈正比关系。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ系统能有效地杀伤ＡＣＣ细胞，可望用于ＡＣＣ的治疗。

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的 研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法 分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果 与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论 TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。

顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性

目的 探讨化疗药物顺铂 (CDDP)对口腔鳞癌细胞凋亡及细胞周期特异性的诱导作用。方法 选用人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113为研究对象 ,应用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法进行观察。结果 CDDP作用Tca8113细胞后 ,细胞增殖变慢 ,增殖指数下降 ;细胞变小、变圆 ,失去贴壁性 ,从附着处脱落。DNA染色后荧光显微镜下观察 ,细胞核呈现橙红色、半月形、不规则块状等凋亡形态变化。透射电镜观察 ,细胞固缩 ,染色质浓聚边缘化 ,凋亡小体形成 ;流式细胞仪测定显示细胞周期发生明显改变 ,细胞分裂阻滞在S期。结论 CDDP能诱导Tca8113细胞凋亡 ,其作用有时间依赖性 ;

HSV-tk/GCV系统杀伤ACC-M细胞的机理研究

目的 为探索HSV-tk/GCV(单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷)基因治疗系统杀伤人高转移性腺样囊性癌细胞ACC-M 的机理。方法 采用荧光染色荧光显微镜观察、细胞DNA 电泳、流式细胞仪检测等方法。结果 研究发现,荧光染色有明显的细胞凋亡小体和染色质边聚现象;在GCV浓度较大(400 μm ol/L)作用时间较长(4 天)时有较明显的DNA 梯状现象;而FCM 发现在400 μm ol/LGCV 作用下有极明显的亚G1 峰。结论 HSV-tk/GCV基因治疗系统杀伤ACC-M

层粘连蛋白与涎腺腺样囊性癌肿瘤生物学特性的关系研究

目的为研究层粘连蛋白与涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ）侵袭和转移的关系。方法用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察２５例ＡＣＣ组织中层粘连蛋白（ＬＮ）的表达与分布。结果ＬＮ主要分布在基底膜上以及部分筛状假囊内，腺管内和肿瘤细胞浆内。经统计学检验，发现ＬＮ与病理分型、ＴＮＭ分期和转移有关，即筛状┐管状型、ＴＮＭ早期和无转移者的ＬＮ多阳性表达，而实体型、ＴＮＭ晚期和转移者，ＬＮ多阴性表达。结论ＬＮ表达的高低与ＡＣＣ临床恶性程度侵袭和转移，均有密切关系。

自体或异体DNL细胞联合rIL-2治疗5例晚期头颈癌的初步观察

自体或异体ＤＮＬ细胞联合ｒＩＬ┐２治疗５例晚期头颈癌的初步观察郭伟邱蔚六何荣根林国础张志愿张陈平竺涵光作者单位：上海第二医科大学第九人民医院颌面外科（上海２０００１１）关键词淋巴结细胞ＩＬ┐２头颈肿瘤作者曾对口腔癌肿瘤引流区淋巴结细胞（ＤＮＬ）的体外...

大鼠舌癌变细胞分化异常的表型特征——角蛋白谱分析

目的 阐明口腔癌变细胞分化异常的表型特征。方法 L SAB免疫组化方法检测 69例 4-硝基喹啉 -1-氧化物 ( 4 NQO)口服诱发大鼠舌癌变各期组织分化标志角蛋白 ( CK) 10 ,13 ,14的表达。结果 随口腔癌变进展 ,CK14自基底层向上逐渐延伸至基底上层表达 ;基底上层 CK13表达逐渐减少 ;基底上层 CK10表达在癌前逐渐上升 ,成癌后则聚然下降。结论 口腔癌变是一种细胞分化异常疾病 。

Ⅳ型胶原及Ⅳ型胶原酶与涎腺腺样囊性癌生物学特性的关系研究

用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察２５例涎腺腺样囊性癌（ＡＣＣ）患者的癌组织中Ⅳ型胶原以及Ⅳ型胶原酶的表达与分布，探讨其与ＡＣＣ侵袭和转移的关系。结果显示，Ⅳ型胶原主要分布在基底膜上以及部分筛状假囊、腺管和肿瘤细胞浆内，Ⅳ型胶原酶分布在肿瘤细胞浆内及周围。经统计学检验，发现筛状－管状型ＡＣＣ，ＴＮＭ早期和无转移者，Ⅳ型胶原多阳性表达，Ⅳ型胶原酶多阴性表达；而实体型ＡＣＣ，ＴＮＭ晚期和转移者，Ⅳ型胶原多阴性表达，Ⅳ型胶原酶多阳性表达。本研究结果表明，Ⅳ型胶原低表达和Ⅳ型胶原酶的高表达可作为判定ＡＣＣ临床恶性程度的指征，是ＡＣＣ侵袭和转移的关键因素之一。

舌鳞癌引流区淋巴结细胞联合平阳霉素的抑瘤作用

由口腔癌颈清扫术标本中的引流区淋巴结制备肿瘤杀伤细胞(DNL),经基因重组白细胞介素2(rlL-2)激活后与平阳霉素(PYM)联合应用,观察对裸鼠移植瘤的抑制作用。实验证明:当效靶比在5:l,rIL-2 5×10~5U·kg/d与PYM5mg·kg/d合用时,具有较明显的增强抑瘤作用。经Burgi修正公式作疗效判别,Q值为1.46(大于1.15),提示DNL细胞/rIL-2+PYM合用有协同作用。本文还就免疫化疗进行了讨论。

维甲酸受体-β基因联合维甲酸对Tca8113细胞的凋亡诱导作用

目的 研究已证实维甲酸受体 -β( Retinoic acid receptor-beta,RARβ)对某些类型的恶性肿瘤细胞有诱导分化和凋亡作用。现观察转导 RARβ基因联合全反式维甲酸 ( all trans retinoic acid,ATRA)对 Tca8113细胞的凋亡作用。方法 先应用脂质体将 RARβ基因导入 Tca8113细胞中 ,然后采用活细胞计数、透射电镜、流式细胞仪等方法观察 ATRA对转基因细胞的凋亡影响和生长抑制作用。结果 转 RARβ基因 Tca8113细胞在 1μmol/LATRA作用 10天后 ,细胞生长抑制率达 90 .2 % ;光镜和透射电镜下观察都可见到典型形态变化的凋亡细胞 ;FCM测定结果表明 ,细胞凋亡率高达 80 .7%。而母本细胞 Tca8113凋亡率小于 2 0 %。结论 RARβ基因可能是 ATRA诱导 Tca8113细胞产生显著凋亡作用的“靶分子”。 RARβ基因联合维甲酸治疗某些口腔鳞癌将是有效和可行的。